Question

20．如图为采用基因工程技术生产海参溶菌酶（SL）的流程．请回答下列问题：

（1）过程I中首先在逆转录酶作用下合成海参溶菌酶cDNA，再以cDNA为模板扩增合成SL目的基因，扩增过程中要用到的酶是热稳定DNA聚合酶．
（2）过程II中构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生相同（填“相同”或“不同”）黏性末端的限制酶．
（3）若要检验SL目的基因是否成功表达，可以用抗原-抗体杂交技术，若没有出现相应的杂交带，则需要用放射性同位素标记的目的基因做探针来检验是否转录出mRNA．
（4）溶菌酶广泛存在于动物的组织、体液及分泌物中，主要通过破坏细菌的细胞壁细胞的裂解，在动物的非特异性免疫中发挥重要作用．

Answer 1

分析 分析题图：Ⅰ表示以RNA为模板合成DNA的逆转录过程；Ⅱ表示构建基因表达载体并将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）Ⅰ表示以RNA为模板合成DNA的逆转录过程，该过程需要逆转录酶的催化；扩增目的基因需要采用PCR技术，其技术需要在较高温度下进行，因此需要热稳定DNA聚合酶．
（2）限制酶切割既可产生黏性末端，也可产生平末端；切割目的基因和切割质粒最好使用同种限制酶，以产生相同的黏性末端．
（3）检测目的基因是否表达出蛋白质可采用抗原-抗体杂交技术；探针是用放射性同位素标记的目的基因．
（4）溶菌酶主要通过破坏细菌的细胞壁而使细菌裂解；体液中的溶菌酶属于免疫中的第二道防线，在非特异性免疫中有重要作用．
故答案为：
（1）逆转录酶     热稳定DNA聚合酶
（2）平     相同
（3）抗原-抗体杂交    放射性同位素标记的目的基因
（4）细胞壁      非特异性

点评 本题主要考查基因工程和免疫调节的相关知识，要求考生识记人体免疫系统的组成，掌握特异性免疫的具体过程；识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，尽管比较综合，但难度不高．