Question

【题目】近年来研究发现，H5亚型禽流感能突破种间屏障感染人类。因此，在流感疫苗开发中考虑对人流感和禽流感主要亚型进行共预防具有重要意义。科研人员针对人流感病毒H3以及禽流感病毒H5进行了相关研究。

（1）H蛋白是构成流感病毒的主要成分，可以作为____________制成疫苗。

（2）研究人员利用Ti质粒构建p—H5/H3共表达的重组质粒（如下图)。设计思路是：获得H5基因和H3基因，先将H5基因整合到含卡那霉素抗性基因的T-DNA(仅含有NheⅠ和XhoⅠ酶切位点）上，再将H3基因插入，获得重组质粒。为达到实验目的，需在H5基因两端分别引入_____和______酶切位点。通常酶切位点的引入方法是在PCR过程中，通过设计使其出现在_______中，进而出现在H5基因中。

（3）研究人员利用农杆菌转化拟南芥细胞_______形成的愈伤组织，筛选后培育得到转基因拟南芥。愈伤组织是由具有_________能力的______细胞组成。将转基因植株自交，若某植株所结种子中具有卡那霉素抗性的占_________，则判断该植株为T-DNA单拷贝插入。

（4）科研人员利用转基因拟南芥生产的p-H5/H3疫苗与传统疫苗相比，具有的优点是____(至少写出两点)。

Answer 1

【答案】 抗原 NheⅠ ClaⅠ和XhoⅠ 引物 脱分化 分生 薄壁 3/4 能实现两种病毒共预防；不具有“病毒”疫苗的危险性（或“安全性更好”)；生产成本低

【解析】

本题以图文结合为情境综合考查学生对基因工程的基本操作程序、免疫调节等相关知识的识记和理解能力以及获取信息和分析问题的能力。

(1) H蛋白是构成流感病毒的主要成分，可以作为抗原制成疫苗。

(2)依题意和图示分析可知：先将H5基因整合到含卡那霉素抗性基因的T-DNA上，而T-DNA仅含有NheⅠ和XhoⅠ酶切位点，可见，构建重组质粒，需用到NheⅠ和XhoⅠ两种限制酶；再将H3基因插入，获得重组质粒，需要H5基因右端有ClaⅠ酶。综上分析，为达到实验目的，需在H5基因左端引入NheⅠ酶切位点，右端引入ClaⅠ和XhoⅠ酶切位点。通常酶切位点的引入方法是在PCR过程中，通过设计使其出现在引物中，进而出现在H5基因中。

(3) 利用农杆菌转化拟南芥细胞需借助植物组织培养技术，相应的细胞在含卡那霉素的培养基中通过脱分化形成愈伤组织，筛选后继续培养得到转基因拟南芥。愈伤组织是由具有分生能力的薄壁细胞组成。若某转基因拟南芥植株为T-DNA单拷贝插入，则该植株相当于一对等位基因的杂合子，将其自交，所结种子中具有卡那霉素抗性的占3/4。

(4) 科研人员研制的p-H5/H3疫苗与传统疫苗相比，具有的优点是：能实现两种病毒共预防；不具有“病毒”疫苗的危险性，安全性更好；生成成本低；稳定性好、便于保存等。