题目内容
11．大肠杆菌菌群数量是衡量食品安全的一项重要指标．下面是检测食品中大肠菌群的常用方法：稀释培养测数法（MPN）．（一）实验原理
（1）大肠杆菌菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气的无芽孢杆菌．
（2）乳糖胆盐发酵管中溴甲酚紫的作用：用溴甲酚紫作指示剂，该指示剂中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色．胆盐的作用：胆盐对很多杂菌有抑制作用，但是对大肠杆菌不造成影响．
（3）伊红美蓝能使大肠杆菌菌落呈深紫色．
（二）实验试剂及器材（略）
（三）实验过程
（1）检样稀释
①将检样25mL放于有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液．
②用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液．按上述操作依次做10倍梯度稀释液，每稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管．
（2）乳糖发酵试验
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管乳糖胆盐发酵管．置于36℃温箱内，培养24h，若①，则可报告为大肠菌群阴性；若②，则可报告为大肠菌群阳性．
（3）分离培养
将大肠菌群阳性的发酵管分别转种在③琼脂平板上，置36℃温箱内，培养24h，然后取出，观察④．
（4）报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值．
请回答下列问题：
①请把上述空缺步骤补充完整：
①所有发酵管中溶液呈蓝紫色（或都不产气）②所有发酵管中溶液呈黄色（或有产气者）③伊红美蓝④菌落颜色
②培养基中必须含有的基本成分是水、无机盐、碳源、氮源．
③在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养24h，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
④若步骤三采用平板划线法分离培养大肠杆菌，操作时，接种环应通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落．
分析 1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2、鉴别、培养大肠杆菌可使用伊红-美蓝培养基，菌落呈黑色或紫黑色有金属光泽．
解答 解：（1）根据实验原理可知，大肠杆菌菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气的无芽孢杆菌，用溴甲酚紫作指示剂，该指示剂中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果所有发酵管中溶液呈蓝紫色，表明溶液呈中性，即说明大肠杆菌不能产酸产气，则可报告为大肠菌群阴性；如果所有发酵管中溶液呈黄色，表明溶液呈酸性，说明大肠杆菌能够产酸产气，则可报告为大肠菌群阳性．
鉴别、培养大肠杆菌可使用伊红-美蓝培养基，菌落呈黑色或紫黑色有金属光泽．
（2）培养基中必须含有的基本成分是水、无机盐、碳源、氮源．
（3）在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养24h，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
④若步骤三采用平板划线法分离培养大肠杆菌，操作时，接种环应通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落．
故答案为：
（1）①所有发酵管中溶液呈蓝紫色（或都不产气）②所有发酵管中溶液呈黄色（或有产气者） ③伊红美蓝 ④菌落颜色
（2）水、无机盐、碳源、氮源
（3）检测培养基平板灭菌是否合格
（4）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够根据实验原理补充实验步骤，识记培养基的主要成分，掌握微生物分离与纯化的一般方法．
练习册系列答案
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2．下列有关培养基的叙述正确的是（ ）
| A． | 只要培养基中有水、碳源、氮源和无机盐等营养成分，噬菌体或大肠杆菌都能正常生长繁殖 | |
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