Question

14．继哺乳动物乳腺发生器研发成功后，膀胱生物发生器的研究也取得了一定进展．最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中．请回答：
（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因导入受精卵（早期胚胎）（细胞）中．
（3）通常采用DNA分子杂交技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组．
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的膀胱上皮细胞中特异表达．
（5）载体经EcoRI（一种限制性核酸内切酶）切割后所形成的黏性末端之一是，则EcoRI的识别序列和切点是-G↓GATCC-（切点用箭头标在序列上）．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（2）由于受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞表达，因此进行基因转移时，通常要将外源基因转入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）检测外源基因是否插入了小鼠的基因组通常采用DNA分子杂交技术．
（4）在研制膀胱生物反应器时，应在目的基因前加入膀胱组织特异性表达的启动子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮细胞中特异表达．
（5）经EcoRI切割后所形成的黏性末端之一是，则EcoRI的识别序列和切点是-G↓GATCC-．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建     
（2）受精卵（早期胚胎）
（3）DNA分子杂交     
（4）膀胱上皮    
（5）-G↓GATCC-

点评 本题综合考查基因工程技术方面的知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤及应用；识记目的基因检测与鉴定的方法；明确动物受体细胞运用显微注射法，并能结合所学的知识准确答题．