Question

10．下面是通过基因工程获得内皮紊的主要受体ET_A的过程，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶Apa I的识别序列为，限制酶Xho I的识别序列为．请分析回答下列问题：

（1）图中cDNA文库小于（填“大于”“等于”或“小于”）基因组文库，若要在短时间内获得大量的目的基因片段，可采用PCR技术进行扩增，扩增过程需使用热稳定DNA聚合酶．
（2）过程③中，限制酶Xho I切割DNA，形成的目的基因的黏性末端是-AGCT（或）．用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向连接到载体上（或防止自身环化）．
（3）过程④中需要用DNA连接酶将目的基因与载体组合在一起；过程⑥中，要用Ca²⁺预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态．利用SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，目的是有利于检测内皮素受体ET_A基因能否表达及表达量．

Answer 1

分析 根据题意和图示分析可知：①②③表示反转录法获得目的基因的过程，④表示构建基因表达载体，⑤表示限制酶切割质粒，⑥表示重组质粒导入受体细胞，⑦表示目的基因的检测．

解答 解：（1）基因组文库包括了该种生物所有的基因，而部分基因文库只包含一种生物的部分基因，因此cDNA文库小于基因组文库．若要在短时间内获得大量的目的基因片段，可采用PCR技术进行扩增，扩增过程需使用热稳定DNA聚合酶．
（2）过程③和⑤利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向连接到载体上（或防止自身环化）．
（3）过程④中需要用DNA连接酶将目的基因与载体组合在一起；过程⑥中，要用Ca²⁺预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态．利用SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，目的是有利于检测内皮素受体ET_A基因能否表达及表达量．
故答案为：
（1）小于     PCR     热稳定DNA聚合
（2）-AGCT（或）    使目的基因定向连接到载体上（或防止自身环化）
（3）DNA连接酶      Ca²⁺       内皮素受体ET_A基因能否表达及表达量

点评 本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能结合图中信息并运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．