题目内容
【题目】淀粉样蛋白前体（APP）是细胞膜上的跨膜蛋白，在多种肿瘤细胞中表达异常。实验人员采用RNA干扰技术，靶向干扰鼻咽癌细胞中APP表达的方法来研究APP的生物学功能。
（1）培养鼻咽癌细胞。细胞培养时，通常在培养液中加入适量的___以补充合成培养基中缺乏的物质，待细胞贴壁长成单层后用______消化处理，分瓶继续培养。
（2）将上述鼻咽癌细胞分成三组，分别用人工脂双层包裹的siAPP-A、siAPP-B、NC的脂质体转染细胞。其中siAPP-A、siAPP-B是不同的靶向干扰APP表达的RNA序列，NC是无义RNA序列，由这三种RNA的功能推测它们的___________一定不同；利用脂质体转染让外源RNA进入癌细胞依据的是____ 。
（3）部分实验结果如下图：
①由图1结果可知，细胞中β-actin蛋白的表达量相对稳定，在实验中可作为________， 以排除细胞培养操作、点样量、检测方法等无关变量对实验结果的影响。实验结 果支持靶向干扰APP表达成功，判断依据是___________。
②分析图2结果可知，实验组的细胞周期比对照组，说明干扰APP的表达可以__________________ 。
（4）实验人员进一步研究发现，干扰APP表达后鼻咽癌细胞的转移能力显著降低，作出此判断的依据是___________。
【答案】动物血清 胰蛋白酶（胶原蛋白酶） 核糖核苷酸序列（碱基序列） 膜的流动性（细胞膜的流动性） 参照（标准或对照） siAPP-A、siAPP-B组APP表达量低于NC组 长抑制鼻咽癌细胞的增殖 干扰APP后鼻咽癌细胞细胞膜上糖蛋白增多，细胞黏着性增强
【解析】
动物细胞培养的条件:
(1)无菌、无毒的环境:(1)消毒、灭菌;(2)添加一定量的抗生素;(3)定期更换培养液,以清除代谢废物。
(2)营养物质:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等,还需加入血清、血浆等天然物质。
(3)温度和PH。
(4)气体环境:
空气(细胞代谢必需的)和5%的
的作用是维持培养液的
。
(1)动物细胞培养时,通常在培养液中加人适量的动物血清，以提供血清中细胞生活必需的一些未知成分,补充合成培养基中缺乏的物质;由于细胞在培养过程中会分泌胶原蛋白等胞外蛋白,使细胞之间相互黏连,甚至细胞与培养瓶的内壁黏连起来,贴壁生长,待细胞贴壁长成单层后就要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,分解细胞外的胶原蛋白,使细胞相互分离,同时使细胞从培养瓶壁上脱落下来，分散成单个细胞后,再分瓶继续培养。
(2)siAPP-A、siAPP-B和NC是不同的RNA,功能不同，因此这三种RNA中的核糖核苷酸序列(碱基序列)不同;分别用含有siAPP-A、siAPP–B、NC的脂质体(人工脂双层)转染癌细胞时，通过膜的流动性,让外源RNA进人癌细胞内。
(3)①由图甲结果可知,分别转人siAPP-A、siAPP-B和NC的细胞中β-actin蛋白的表达量相对稳定,在实验中可作为标准进行对照,排除了细胞培养操作点样量检测方法等无关变量对实验结果的影响;转入siAPP-A和siAPP--B的实验组中的细胞内APP表达量比转人无义RNA作为对照的NC组少,但是不影响β-actin蛋白的表达，说明转人的siAPP-A和siAPP-B能靶向性干扰癌细胞中APP的表达。
②由图乙结果可知,转人siAPP-A和siAPP-B的实验组中的细胞比作为对照的NC组细胞数量少,说明癌细胞的增殖受到了一定程度的抑制,相同时间内细胞的分裂次数减少,细胞周期比对照组长。
(4)细胞膜表面的糖蛋白减少,癌细胞之间的黏着性下降是癌细胞容易发生扩散和转移的重要原因。干扰APP表达后鼻咽癌细胞的转移能力显著降低,推测可能的原因是于扰APP表达后,鼻咽癌细胞细胞膜上糖蛋白增多,细胞黏着性增强,癌细胞不易发生扩散和转移。
