Question

[生物一现代生物科技专题]必答题
血管内皮生长因子（VE．GF）能促进眼部视网膜随管的病理性生长．临床上可用VEGF抗体的Fab片段（即抗体的活性片段）作为药物治疗视网膜病变．以下是利用大肠杆菌来大量和合成该抗体片段的技术路线图，请回答下关问题：

（1）科学家已经测出VEGF的抗体Fab片段的氨基酸序列，因此可以通过

 

方法来获取目的基因．获取目的基因后，还需要在其两端加上限制酶HindIII和XhoI识别序列和启动子T7等序列，T7的位置应该在

 

（填l/2/3/4）．
（2）大肠杼菌经Ca²⁺处理，成为

 

细胞，能吸收外源DNA，与重组质粒混合一段时间后培养，培养基需添加

 

以筛选目的菌株．将筛选出的大肠杆菌进行扩大培养，可以用

 

作为抗原与提取出的蛋白杂交来鉴定是否合成抗体Fab片段蛋白．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示是利用大肠杆菌来大量和合成该抗体片段的技术路线图，首先获得目的基因（血管内皮生长因子（VE．GF），其次构建基因表达载体，然后将基因表达载体导入受体细胞（大肠杆菌细胞），最后进行筛选、培养和检测．

解答： 解：（1）科学家已经测出VEGF的抗体Fab片段的氨基酸序列，因此可以通过人工合成法来获取目的基因，即根据Fab片段的氨基酸序列推测出信使RNA序列，再推测出结构基因的核苷酸序列，然后用化学的方法以单核苷酸为原料合成．获取目的基因后，还需要在其两端加上限制酶HindIII和XhoI识别序列和启动子T7等序列，启动子应位于目的基因上游，且不能被限制酶切割去除，因此T7的位置应该在图中的2处．
（2）大肠杼菌经Ca²⁺处理，成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞；由图可知，构建基因表达载体时，四环素抗性基因被破坏，而卡那霉素抗性基因没有被破坏，因此在培养基需添加卡那霉素以筛选目的菌株．将筛选出的大肠杆菌进行扩大培养，可以用血管内皮生长因子（VEGF）作为抗原与提取出的蛋白杂交来鉴定是否合成抗体Fab片段蛋白．
故答案为：
（1）人工合成法    2
（2）感受态    卡那霉素     血管内皮生长因子（VEGF）

点评：本题结合利用大肠杆菌来大量和合成该抗体片段的技术路线图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中的细节，能结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．