Question

10．无菌技术常使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，其使用的正确操作顺序是（　　）
①加水 ②排冷气 ③装置灭菌物品 ④100kPa下灭菌  ⑤加盖 ⑥排气至0KPa后，打开灭菌锅．

• A． ①③⑤②④⑥
• B． ②③⑤①④⑥
• C． ①②④⑤③⑥
• D． ②⑤①⑥④③

Answer 1

分析 1、高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加．在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃．在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢．
2、注意：完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底．高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底．
3、操作步骤：（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜．
（2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品．注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果．三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞．
（3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内．再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气．
（4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气．待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升．当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间．本实验用 1.05kg/cm2，121.3℃，20分钟灭菌．
（5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品．如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染．
（6）将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用．

解答 解：高压蒸汽锅灭菌的操作步骤：
（1）首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜．
（2）放回灭菌桶，并装入待灭菌物品．
（3）加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内．
（4）用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气．
（5）灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品．如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染．
（6）将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用．
故选：A．

点评 本题考查微生物的分离和培养，重点考查无菌技术，只有考试识记高压蒸汽灭菌的具体操作步骤即可正确答题，属于考纲识记层次的考查．