题目内容

限制性同切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
(1)请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
(2)请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
(3)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来?为什么?
(1)

(2)

(3)能,因为形成的黏性末端相同
练习册系列答案
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在基因工程操作中,具有互补黏性末端的两DNA片段之间的连接比较容易,因此,在DNA重组中比较常用。

(1)有些限制性核酸内切酶虽然识别序列不同,如ClaⅠ和HapⅡ的识别序列和切割位点分别是AT↓CGAT、C↓CGG,但它们切割DNA分子所得的DNA片段具有相同的黏性末端,科学家称这样的一组限制性核酸内切酶为同尾酶。

①若某一DNA分子中有一个ClaⅠ的识别序列,用ClaⅠ完全切割后,再用DNA连接酶处理,最后将获得    ▲    种DNA分子,这些DNA分子中    ▲    (填“有”或“无”)ClaⅠ的识别序列。

②若某一DNA分子中有ClaⅠ和HapⅡ的识别序列,用ClaⅠ和HapⅡ完全切割后,取如下图所示两个片段,用DNA连接酶处理能形成重组DNA片段,因为    ▲    。该重组DNA片段能否再被ClaⅠ或HapⅡ识别并切割?    ▲   

(2)如下图,甲表示某一外源DNA,乙表示待重组的另一DNA(其中a、b、c表示该DNA不同片段),丙表示甲与乙重组后形成的重组DNA。

 


①甲和乙需要用限制性核酸内切酶处理后才能进行连接,如果用ClaⅠ来处理甲和乙,那么,要得到如图丙所示的重组DNA,甲和乙中至少分别应该有    ▲        ▲    个ClaⅠ的识别序列,形成的如丙所示的重组DNA有    ▲    种。

②如果要在实验中只获得如图丙所示的一种重组DNA,可以选择使用    ▲    种限制性核酸内切酶来处理甲和乙,使甲完全切割后产生的两端末端    ▲    (填相同或不同),甲的两端末端分别与乙切割后产生的a、c的末端    ▲    (填相同或不同),这种酶切方式在基因工程中特别有用,可以减少筛选重组DNA的工作量。

在基因工程操作中,具有互补黏性末端的两DNA片段之间的连接比较容易,因此,在DNA重组中比较常用。

(1)有些限制性核酸内切酶虽然识别序列不同,如ClaⅠ和HapⅡ的识别序列和切割位点分别是AT↓CGAT、C↓CGG,但它们切割DNA分子所得的DNA片段具有相同的黏性末端,科学家称这样的一组限制性核酸内切酶为同尾酶。

①若某一DNA分子中有一个ClaⅠ的识别序列,用ClaⅠ完全切割后,再用DNA连接酶处理,最后将获得        种DNA分子,这些DNA分子中    (填“有”或“无”)ClaⅠ的识别序列。

②若某一DNA分子中有ClaⅠ和HapⅡ的识别序列,用ClaⅠ和HapⅡ完全切割后,取如下图所示两个片段,用DNA连接酶处理能形成重组DNA片段,因为        。该重组DNA片段能否再被ClaⅠ或HapⅡ识别并切割?       

…TATAT      CGGGTCA…

…ATATAGC     CCAGT…

ClaⅠ切割片段              HapⅡ切割片段

(2)如下图,甲表示某一外源DNA,乙表示待重组的另一DNA(其中a、b、c表示该DNA不同片段),丙表示甲与乙重组后形成的重组DNA。

①甲和乙需要用限制性核酸内切酶处理后才能进行连接,如果用ClaⅠ来处理甲和乙,那么,要得到如图丙所示的重组DNA,甲和乙中至少分别应该有                个ClaⅠ的识别序列,形成的如丙所示的重组DNA有        种。

②如果要在实验中只获得如图丙所示的一种重组DNA,可以选择使用        种限制性核酸内切酶来处理甲和乙,使甲完全切割后产生的两端末端        (填相同或不同),甲的两端末端分别与乙切割后产生的a、c的末端        (填相同或不同),这种酶切方式在基因工程中特别有用,可以减少筛选重组DNA的工作量。

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