Question

随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因测序工作的完成，人类跨入了蛋白质时代．对蛋白质进行研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质．请回答下列问题：
（1）蛋白质的提取和分离一般分为四步：

 

、

 

、

 

和纯度鉴定．
（2）如果要从红细胞中分离出血红蛋白，实验前取新鲜血液时要在采血容器中预先加入柠檬酸钠溶液，这样做的目的是

 

．
（3）血红蛋白的提取又可以细分为：红细胞的洗涤、

 

、分离血红蛋白溶液和

 

．其中分离血红蛋白溶液时需要用

 

（仪器）分出下层红色透明液体．
（4）凝胶色谱法：也称做

 

，是根据

 

的大小分离蛋白质的有效方法．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动

 

．
（5）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳消除了净电荷对迁移率的影响，使电泳迁移率完全取决
于

 

．经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行

 

鉴定
（6）粗分离中透析的目的是去除相对分子质量较

 

的杂质
（7）装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡，凝胶色谱柱必须重新装填．色谱柱制作成功的标志是

 

．

Answer 1

考点：蛋白质的提取和分离

专题：

分析：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．

解答： 解：（1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．
（2）柠檬酸钠可以防止血液凝固．
（3）血红蛋白的提取和分离过程中的样品处理阶段包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液和透析，其中分离血红蛋白溶液时需要用分液漏斗分出下层红色透明液体．
（4）样品纯化是通过凝胶色谱法（分配色谱法）去掉分子量较大的杂质．凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快．
（5）一般采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术中，消除了净电荷对迁移率的影响，所以分子的迁移速率主要取决于分子的大小．
（6）血红蛋白溶液的粗分离采用的方法是透析，即将集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，去掉分子量较小的杂质，原理是小分子杂质可以通过透析袋进入缓冲液中，血红蛋白分子量较大，不能通过透析袋进入缓冲溶液．
（7）装填凝胶色谱柱时，红色区带均匀一致地移动是色谱柱制作成功的标志．
故答案为：
（1）样品处理　粗分离　纯化
（2）防止血液凝固
（3）血红蛋白的释放　透析　分液漏斗
（4）分配色谱法   相对分子质量   快
（5）分子的大小  纯度  
（6）小
（7）红色区带均匀一致地移动

点评：本题考查血红蛋白提取和分离的相关知识，考查基本，来自课本，是基础知识考试的理想题目，学生应理解加记忆．