题目内容

【题目】现如今为了缓解温室效应,人类开始开发清洁能源,植物材料是良好的生产原料,其中最重要的步骤是木质纤维素转化为可发酵糖,由于纤维素酶具有 高效、环境友好的特点而被广泛采用。自然界中,能高效分解和利用纤维素的微生物很多,其中丝状真菌产生纤维素酶活力最高且包含各种降解酶。研究发现曲霉菌体内与纤维素转化相关基因多,里氏木霉虽然相关基因较少,但其外分泌纤维素酶的能力较其他丝状真菌最高。某科研小组欲对里氏木霉进行遗传改造以进一步提高其纤维素的分解能力。(己知真菌不能生活在含有潮霉素的环境中,而潮霉素磷酸转移酶可以抵抗潮霉素的这种作用。)

(1)从浩瀚的“基因海洋”中获得特定的目的基因的方法有(____)

①从供体细胞的DNA中直接分离基因②从受体细胞的DNA中直接分离基因③人工合成基因④复制⑤PCR法⑥cDNA文库法

A.①②④⑤ B.①③⑤⑥ C.③④⑤⑥ D.②④⑤⑥

(2)研究发现,在对丝状真菌转化时也可以用农杆菌转化法,该方法主要利用了农杆菌体内的________,在转化植物细胞时,除了该法还可以使用_____________法和_____________法。

(3)下图为研究人员构建的基因表达载体(hph为潮霉素磷酸转移酶基因),则目的基因应插入_____区段,原因是_____________。在筛选菌株时,应在培养基中添加__________________________。

【答案】 B Ti质粒 基因枪 花粉管道 T—DNA T—DNA可以转移并整合到宿主细胞的基因组当中 潮霉素

【解析】试题分析:本题综合考查学生对基因工程的知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解基因工程的基本操作程序并形成清晰的知识网络。在此基础上,结合问题情境,从题图和题意中提取有效信息,进行相关问题的解答。

(1) 目的基因的获取途径有:①从供体细胞的DNA中直接分离基因;③已知核苷酸序列的较小基因,直接利用DNA合成仪用化学方法合成,即人工合成基因;⑤通过PCR技术扩增目的基因;⑥从基因文库中获取:包括基因组文库和cDNA文库等。综上所述,B正确,A、C、D均错误。

(2)将目的基因导入受体细胞,可用农杆菌转化法,该方法主要利用了农杆菌体内的Ti质粒。在转化植物细胞时,除了采用农杆菌转化法外,还可以使用基因枪法和花粉管道法。

(3)农杆菌转化法原理是:农杆菌感染相应细胞,并将其Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。据此分析构建的基因表达载体示意图可知:目的基因应插入T—DNA区段,原因是:T—DNA可以转移并整合到宿主细胞的基因组当中。己知真菌不能生活在含有潮霉素的环境中,而潮霉素磷酸转移酶可以抵抗潮霉素的这种作用,而构建的基因表达载体中含有潮霉素磷酸转移酶基因(hph),由此推知:成功导入目的基因的菌株能够在含有潮霉素的培养基中生存,而其它的菌株则不能生存,所以,在筛选菌株时,应在培养基中添加潮霉素。

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