Question

14．下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题．

限制酶	BamH I	Hind III	EooR I	Sma I
识别序列及切割位点

（1）一个图1所示质粒分子经SmaⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团．用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是破坏标记基因和目的基因．
（2）可以选用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA，与只使用EcoR I相比较，选用两种酶切割的优点在于可以防止质粒和目的基因切割后自身环化．
（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶酶，两种基因能拼接到一起的原因是基因的组成成分和结构相似．
（4）从cDNA文库中分离获取目的基因，可以用PCR技术扩增，其中要用到Taq酶或热稳定DNA聚合酶酶．
（5）如果培育出抗虫的植株，从个体水平角度，可以用进行抗虫实验方法检测．

Answer 1

分析 分析图1：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上．
分析图2：质粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割位点位于抗生素抗性基因上．

解答 解：（1）质粒经过切割后会形成链状DNA分子，而每一条链状DNA分子都含有2个游离的磷酸基团．用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒时，会导致目的基因与抗性基因被破坏，因此不能用SmaⅠ构建重组质粒．
（2）BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶切割产生的黏性末端不同，若用这两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，再用DNA连接酶连接两者时，可避免切割的外源DNA、质粒的自身环化．
（3）将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶．不同生物的DNA具有相同的化学组成和结构，因此能连接在一起．
（4）从cDNA文库中分离获取目的基因，可以用PCR技术扩增，其中要用到Taq酶或热稳定DNA聚合酶．
（5）如果培育出抗虫的植株，从个体水平角度，可以用进行抗虫实验方法检测．
故答案为：
（1）2个    破坏标记基因和目的基因
（2）BamHⅠ和HindⅢ（或EcoRⅠ和HindⅢ）质粒和目的基因切割后自身环化
（3）DNA连接酶     基因的组成成分和结构相似
（4）PCR      Taq酶或热稳定DNA聚合酶
（5）进行抗虫实验

点评 本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，重点是限制酶和DNA连接酶，要求考生认真分析图1和图2，能根据图中和表中信息选择合适的限制酶，准确判断使用DNA连接酶连接的结果，再运用所学的知识答题．