Question

【题目】我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。据图回答下列问题（限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ切割形成的末端均不相同）：

（1）过程②必需的酶是__________酶，过程④必需的酶是__________酶。⑤为提高成功率，常用__________溶 液处理大肠杆菌细胞。

（2）为了使目的基因和质粒 B 定向连接并且有利于受体细胞的筛选，酶 1 是____ 。

（3）如果用限制酶 PstⅠ、EcoRⅠ和 HindⅢ对质粒 A 进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割 时，则形成的 DNA 片段共_种，含有完整四环素抗性基因的 DNA 片段的概率是__________。

（4）作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含____ 基因，以利于筛选出含重组载体的受体菌。

（5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程____ ，为什么？____ 。

Answer 1

【答案】(1)反转录（逆转录） DNA连接酶 CaCl2（2）EcoRⅠ （3）9 1/3

(4)tctR（四环素抗性）（5）不能利用人的皮肤细胞来完成①过程，因为生长激素基因不在人皮肤细胞中表达，在垂体细胞中表达。

【解析】

试题

（1）过程②是指由RNA获得DNA的过程，为逆转录过程，需要逆转录酶；过程④为目的基因与运载体结合成重组质粒，需要DNA连接酶；⑤为把重组DNA分子导入大肠杆菌中，一般要用CaCl2溶液处理大肠杆菌细胞。

（2）为了使目的基因和质粒B定向连接，并且有利于受体细胞的筛选，限制酶I与另一端的限制酶PstⅠ不同，分析质粒可知，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。

（3）用一种限制酶进行切割，由于3种酶的切割位点不同，因此能得到三种DNA片段；用两种限制酶进行切割时，能得到六种DNA片段；用三种限制酶同时切割，得到的DNA片段共有三种，与用两种酶切割后的片段重复，因此共得到9种片段；这9中片段中，有3种片段含有完整四环素抗性基因，所占比例为1/3。

（4）作为受体的大肠杆菌应该不含标记基因，由于ampR基因被破坏，tctR基因为标记基因，故受体菌中不含tctR基因。

（5）不能用人的皮肤细胞获取生长激素mRNA，因为在人的皮肤细胞中生长激素基因不表达，不能获得生长激素的mRNA。