Question

9．微生物与生物工程
Ⅰ、研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示．

（1）①过程称为稀释，②过程是为了筛选获得单个菌落．在1号培养基上挑出能产生淀粉酶的嗜热菌菌落的鉴别方法是培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈．
（2）按功能分Ⅰ号培养基称为选择培养基；该培养基中必须添加的成分有ACD（多选）等．
A．琼脂B．葡萄糖C．硝酸铵D．淀粉
（3）一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了杀死培养基中的细菌芽孢．
Ⅱ、图2为单克隆抗体制备过程的示意图
（4）若只考虑细胞的两两融合，试管中有3种融合细胞，筛选后进一步培养的是骨髓杂交瘤细胞细胞，此细胞的特点是既能产生单一抗体，又能体外快速增殖．
（5）相对细菌而言，动物细胞离体培养更需关注培养基的渗透压，这是因为动物细胞C．
A．渗透压远高于细菌或植物细胞的渗透压
B．没有成熟大液泡，渗透压调节能力差
C．没有细胞壁，对培养基的渗透压更敏感
D．生长缓慢，各生长阶段对环境的渗透压要求不同
（6）已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断．人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖；鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，但能不断分裂增殖．写出过程I分离筛选出杂种细胞的方法培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞．

Answer 1

分析 微生物筛选培养成功的关键是防止杂菌污染培养物和操作者，必须要做好相应的消毒或灭菌及严格的无菌操作．从混杂的微生物中筛选目的微生物的一般步骤是：样品取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．培养基制作完成后要调整pH，再灭菌，该筛选要使用以淀粉为唯一的碳源的选择培养基．
单克隆抗体制备过程中需要进行两次筛选：第一次是筛选出杂交瘤细胞，第二次是筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞．

解答 解：（1）①过程称为稀释，②过程表示稀释涂布平板，该过程能筛选并获得单个菌落．根据题意可知，该嗜热菌能够产生淀粉酶，因此在Ⅰ号培养基上挑出能产生淀粉酶的嗜热菌菌落的鉴别方法是培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈．
（2）按功能分Ⅰ号培养基称为选择培养基；该培养基中必须添加以淀粉为糖原的唯一碳源，另外还需要加入琼脂作为凝固剂，以及硝酸铵作为氮源，而不添加葡萄糖．
（3）一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了杀死培养基中的细菌芽孢．
（4）若只考虑细胞的两两融合，试管中有3种融合细胞，即杂交瘤细胞、B细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞，筛选后进一步培养的是骨髓杂交瘤细胞，该细胞既能产生单一抗体，又能体外快速增殖．
（5）动物细胞无细胞壁，培养液渗透压较低时，动物细胞会吸水涨破，而细菌细胞含有细胞壁，则不会出现吸水涨破的情况，所以动物细胞培养基要特别关注渗透压．
（6）在培养液中加入氨基嘌呤，培养后收集增殖细胞．加入氨基嘌呤后，使D合成途径阻断，仅有D全合成途径的骨髓细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，淋巴细胞一般不分裂增殖．因此培养液中加入该物质后，不能生长的细胞有骨髓瘤细胞、融合的淋巴细胞、融合的骨髓瘤细胞、淋巴细胞．人淋巴细胞和骨髓癌细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的S途径合成DNA而增殖，因此只有杂种细胞能生长．
故答案为：
（1）稀释    筛选获得单个菌落   透明圈  
（2）选择培养基    ACD
（3）杀死培养基中的细菌芽孢  
（4）3   骨髓杂交瘤细胞    既能产生单一抗体，又能体外快速增殖
（5）C  
（6）培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞

点评 本题考查了微生物的分离与纯化以及单克隆抗体制备的有关知识，要求考生能够题干和题图信息解决微生物培养的相关试题，掌握单克隆抗体制备的过程，识记最终获得的杂交瘤细胞的特点．