Question

重组酵母乙肝疫苗是通过转基因的方法将人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因导入毕赤酵母中获得的，具有原料易得、产量大、安全、高效等特点．如图是重组酵母乙肝疫苗的生产过程．
（1）与大肠杆菌相比，毕赤酵母菌具有

 

等细胞器，用其作为基因工程的受体细胞，可以对合成的乙肝表面抗原进行

 

，并分泌到细胞外，便于提取．
（2）图中氨苄青霉素抗性基因作为

 

，作用是

 

．
（3）PCR技术利用

 

原理，该技术使用的工具酶是

 

．
（4）从资料3可以看出，不同种限制性内切酶切割DNA分子后产生的末端类型有

 

和

 

．试写出AvrⅡ酶切割后产生的末端片段：

 

（5）为避免质粒和目的基因自身环化，在将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组时，应该用限制酶

 

处理HBsAg基因两侧．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析图表：构建基因表达载体时，使用限制酶SacⅠ切割会破坏启动子，使用限制酶BglⅡ切割会导致重组质粒丢失启动子和抗性基因，因此为避免质粒和目的基因自身环化，在将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组时，应该用限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ处理HBsAg基因两侧．

解答： 解：（1）大肠杆菌属于原核生物，其细胞中只有核糖体一种细胞器，而毕赤酵母菌属于真核生物，其细胞中具有内质网、高尔基体等细胞器，用其作为基因工程的受体细胞，可以对合成的乙肝表面抗原进行加工（修饰），并分泌到细胞外，便于提取．
（2）图中氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，作用是鉴定受体细胞中是否含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因，从而将含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因的细胞筛选出来．
（3）PCR技术的原理是DNA复制；该技术是在较高温度条件下进行的，因此需要使用热稳定DNA聚合酶．
（4）从资料3可以看出，不同种限制性内切酶切割DNA分子后产生的末端类型有平末端和黏性末端．AvrⅡ酶切割后产生的黏性末端，其产生的末端片段为：．
（5）由以上分析可知，为避免质粒和目的基因自身环化，在将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组时，应该用限制酶SnaBⅠ、AvrⅡ处理HBsAg基因两侧．
故答案为：
（1）内质网、高尔基体    加工（修饰）
（2）标记基因    鉴定受体细胞中是否含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因，从而将含有人乙肝表面抗原（HbsAg）的基因的细胞筛选出来
（3）DNA复制    热稳定DNA聚合酶
（4）平末端    黏性末端  
（5）SnaBⅠ、AvrⅡ

点评：本题结合图表，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、适宜的工具及具体的操作步骤，能结合图中和表中信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查．