Question

13．我国最早的诗集《诗经》中有“田中有庐，疆场有瓜是剥是菹”的诗句，其中“庐”和“瓜”是蔬菜，“剥”和“菹”是腌制加工的意思．泡菜是一种历史悠久、深受群众喜爱的传统美食．某兴趣小组的同学进行了制作泡菜的实践活动．
回答下列问题：
（1）按清水与盐质量比为4：1的比例制好盐水后，需将盐水煮沸，其作用是除去盐水中的氧气和杀菌．
（2）为测定泡菜中亚硝酸盐含量，首先要配制烟硝酸盐标准显色液，并与样品进行比较．泡菜制作的第3-5天亚硝酸盐含量较高不宜食用，原因是适宜的pH、温度和一定微生物作用下亚硝酸盐转变成致癌物质亚硝胺．
（3）若将稀释10⁵倍的某细菌菌液，用直接计数法和稀释涂布平板法进行计数．
①直接计数法：用吸管吸取0.1ml该菌液，滴于血球计数板上的盖玻片边缘，待该细菌全部沉降到计数室底部，用显微镜直接计数，并计算出每升菌液的细菌数目．
②稀释涂布平板法计数：在五个固体培养基上分别接种0.1ml该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：20、40、152、154、156，则每升菌液中细菌数量为1.255×10¹¹个．
③正常操作情况下，上述两种计数法中，直接计数法统计获得的细菌数量数目偏多，原因是直接计数法无论菌体死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．

Answer 1

分析 1、测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料．将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）按清水与盐质量比为4：1的比例制好盐水后，需将盐水煮沸，其作用是除去盐水中的氧气和杀菌．
（2）为测定泡菜中亚硝酸盐含量，首先要配制烟硝酸盐标准显色液，并与样品进行比较．泡菜制作的第3-5天亚硝酸盐含量较高不宜食用，原因是适宜的pH、温度和一定微生物作用下亚硝酸盐转变成致癌物质亚硝胺．
（3）若将稀释10⁵倍的某细菌菌液，用直接计数法和稀释涂布平板法进行计数．
①采用直接计数法时，应该先盖盖玻片，再在盖玻片的边缘滴加培养液．
②采用稀释涂布平板法计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此每升菌液中细菌数量=（40+154+156+152）÷4÷0.1×10⁵×10³=1.255×10¹¹个．
③由于直接计数法无论菌体死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，上述两种计数法中，直接计数法统计获得的细菌数量数目偏多，而稀释涂布平板法统计获得的细菌数量偏少．
故答案为：
（1）除去盐水中的氧气和杀菌
（2）烟硝酸盐    适宜的pH、温度和一定微生物作用下亚硝酸盐转变成致癌物质亚硝胺
（3）①盖玻片
②1.255×10¹¹
③直接计数法    直接计数法无论菌体死活均被计数，而稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

点评 本题考查微生物的分离和培养、泡菜的制作，要求考生识记接种微生物常用的两种方法，掌握计数微生物的方法及注意事项；识记测定亚硝酸盐含量的原理，能结合所学的知识准确答题．