Question

下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：

NaNO3:2g	K2HPO4: 1g
KCl: 0.5g	MgSO4: 0.5g
FeSO4:0.01g	蔗糖：30g
琼脂：15~20g	蒸馏水：1 000 mL

一、实验目的（略）

二、实验材料和用具（略）

三、实验方法和步骤

1.接种

（1）接种前，准备好盛有配方如上表的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。

（2）取10 g土壤，放在无菌研钵中，注入5 mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。

（3）将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15~20处。

（4）接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。

2.培养

将接种过的培养皿放入恒温箱内，在室温下培养3~4 d。

3.观察

3~4 d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落的为自生固氮菌。

4.镜检（略）

该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出并改正。

Answer 1

①培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO₃改为不含氮的钠盐。

②实验步骤接种（2）中用蒸馏水是错误的，应改为无菌水。

③实验步骤（3）中将培养皿盖放在桌面上是错误的，应改为略微打开培养皿盖。

④实验步骤接种（4）中没有写实验内容、接种人的姓名和日期，应加上这些内容。      ⑤实验步骤培养中，应将“在室温下培养3~4 d”改为“在28~30 ℃的温度下培养3~4 d”。⑥实验步骤观察中“仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落”是错误的。应改为“仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液初为无色透明，后为乳白色，最后变为褐色”。

解析:

考查对自生固氮菌分离实验的掌握：（1）自生固氮菌分离实验的原理是：将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能正常生长繁殖。

（2）分离自生固氮菌的步骤：①接种：取灭菌的无氮培养基，在无菌研钵中用无菌水（而不是蒸馏水）制备稀泥浆，接种时培养皿盖应略微打开以防空气中杂菌进入，接种后盖上培养皿盖，并在盖上写明实验内容、接种人的姓名和日期。

②培养：将培养皿移入恒温箱内，28~30 ℃的温度下培养3~4天。

③观察：观察培养基上稀泥浆周围出现的培养物——黏液，黏液初为无色透明，后为乳白色，最后变为褐色，表明含有自生固氮菌。根据题干内容和以上步骤、原理进行对比，即可找出其中错误之处。