Question

【题目】[生物——选修1：生物技术实践]（15分）

某同学家的门前有一条小溪，近几年由于上游几家造纸厂不断向其中排放废水，小溪变得不再清澈。某同学想测定该溪水中的细菌含量情况。回答下列问题：

（1）先根据所学知识制备牛肉膏蛋白胨固体培养基。制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，其中灭菌常用的方法是_______________；为了防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，所倒平板应如何处理？____________________________。

（2）该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌含量，他所选择的方法应是___________（填“平板划线法”或“稀释涂布平板法”）；该同学在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是______________________________________________________。值得注意的是，他所选择的这种方法统计的结果往往比实际细菌的数目要低，这是因为①___________________________________，②____________________________________________。除了上述的计数法外，______________也是测定微生物数量的常用方法。

（3）该同学欲将所分离出的某种细菌临时保藏，应选择的保藏方法是___________________________（填“接种到试管的斜面培养基上，等到菌落长成后，放入冰箱低温保藏”或“甘油管藏”）。

Answer 1

【答案】（1）高压蒸汽灭菌法（1分） 待平板冷凝后，将平板倒置

（2）稀释涂布平板法 检测平板灭菌是否彻底 ①该方法只能统计样品中活菌的数目，死菌无法统计 ②当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 显微镜直接计数

（3）接种到试管的斜面培养基上，等到菌落长成后，放入冰箱低温保藏

【解析】（1）对培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法。由于平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，为防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，需将平板倒置。（2）稀释涂布平板法可用来统计菌落数目，而平板划线法不能用来统计菌落数目，只可用来分离。接种前随机取若干灭菌后的空平板先行培养一段时间的目的是检测平板灭菌是否彻底。由于稀释涂布平板法是通过统计菌落数来代表细菌数，因此只能统计活菌数，不能统计死菌；又因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此此方法统计的结果比实际数目要小。此外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。（3）临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上，等到菌落长成后，放入冰箱低温保藏；而需要长期保藏的菌种需采用甘油管藏的方法保藏。