Question

【题目】请回答基因工程相关问题：

（1）限制酶切割DNA分子时，断裂的是___________键为了保证目的基因与载体的正确连接，通常用两种_________________________________不同的限制酶同时处理含目的基因的DNA片段与载体

（2）若要通过反转录得到胰岛素基因，可从人体的___________细胞中提取mRNA提取mRNA时，在提取液中一般要加入RNA酶抑制剂，其目的是______________________若要在体外得到大量胰岛素基因，可采用______________________技术，该技术过程中设计引物时______________________（填“需要”或“不需要”）知道胰岛素基因的全部序列

（3）将重组质粒转化大肠杆菌时，大肠杆菌本身___________（填“含有”或“不含有”）质粒一般情况下不能用未经处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________________。

Answer 1

【答案】磷酸二酯 识别序列和切割位点 胰岛B 防止mRNA（RNA）被降解 PCR 不需要 不含有 未经处理的大肠杆菌吸收外源DNA的能力较弱

【解析】

1、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

2、PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。PCR技术的原理是DNA复制，需要的条件有：模板DNA（目的基因所在的DNA片段）、原料（四种脱氧核苷酸）、一对引物（单链的脱氧核苷酸序列）、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。

（1）根据限制酶的作用可知，限制酶切割DNA分子时，断裂的是磷酸二酯键由于同种限制酶切割得到的目的基因或质粒的两端黏性末端相同，会出现自体相连的现象，所以为了保证目的基因与载体的正确连接，通常用两种识别序列和切割位点不同的限制酶同时处理含目的基因的DNA片段与载体

（2）由于胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，所以若要通过反转录得到胰岛素基因，可从人体的胰岛B细胞中提取mRNA提取mRNA时，在提取液中一般要加入RNA酶抑制剂，其目的是防止mRNA（RNA）被降解。可采用PCR技术在体外扩增目的基因。在利用PCR技术扩增目的基因时，只需要一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，而不需要知道胰岛素基因的全部序列

（3）质粒上的抗性基因一般用作标记基因，为了便于筛选导入了重组质粒的大肠杆菌，在将重组质粒转化大肠杆菌时，所选的大肠杆菌本身一般不含有质粒若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，常用Ca2+处理使之成为易于吸收外源DNA的感受态细胞。