题目内容
【题目】尼古丁是一种化学物质，该物质对人类有致畸、致癌等毒副作用。下图是从工业废水中筛选出能降解尼古丁的假单胞杆菌的操作流程图。请回答下列相关问题：
（1）培养基中要有满足微生物生长繁殖所需要的___________等营养物质。制备平板培养基与稀释用的培养基主要的区别在于制备平板培养基时，其中需要添加___________。
（2）选择培养时应使用选择培养基，目的是使该培养基利于__________________的生长繁殖。对选择培养后得到的样液进行稀释操作的具体过程是：①将分别盛有9mL水的5支试管苗菌，并按101—105的顺序编号；②______________________。③重复第②步的混匀操作，依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。
（3）取105倍的稀释样液0.1mL均匀涂布到平板上，然后在适宜条件下进行培养，在培养时需要将培养皿倒置，原因是____________________；经过一段时间培养，3个平板上的菌落数分别为42、52和68，则每升样液中所含有的假单孢杆菌活菌数量为__________个，这一统计结果一般比实际活菌数__________（填“偏小”“偏大”或“相等”）。
【答案】水、无机盐、碳源和氮源琼脂（或凝固剂）假单胞杆菌（或目的菌）用移液管吸取1mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中并混匀，再从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的是试管中防止冷凝水落到培养基上引起污染5.4×1010偏小
【解析】
微生物的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。微生物的接种方法有平板划线法与稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于微生物的计数。用稀释涂布平板法测定同一样品中的假单胞杆菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出样品中的假单孢杆菌活菌总数。
（1）微生物的生长繁殖需要的营养物质有水、无机盐、碳源和氮源，平板培养基属于固体培养基，制备时需要加入琼脂（或凝固剂）。
（2）选择培养的目的是增加所需微生物的浓度，该培养基有利于假单胞杆菌（或目的菌）的生长繁殖，同时能抑制或阻止其他微生物的繁殖，对选择培养后得到的样液进行稀释操作的具体过程是：①将分别盛有9mL水的5支试管苗菌，并按101—105的顺序编号；②用移液管吸取1mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中并混匀，再从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的是试管中。③重复第②步的混匀操作，依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。
（3）涂布好平板后，在适宜条件下进行培养，在培养时需要将培养皿倒置，其原因是防止凝结在皿盖上的冷凝水落到培养基表面引起污染，3个平板上的菌落数分别为42、52和68，3个平板上的菌落的平均数为（42+52+68）/3=54个，则每升样液中所含有的假单孢杆菌活菌数量为54/0.1×105×103=5.4×1010个。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此这一统计结果一般比实际活菌数偏小。
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