Question

6．为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种．
（1）从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，然后利用PCR技术分别进行扩增．
（2）如图1，选用图中的限制酶ClaⅠ处理两个基因后再用DNA连接酶处理，得到A、D（填图中字母）端相连的融合基因．

（3）将上述融合基因插入图2所示Ti质粒的T-DNA中，构建基因表达载体并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，得到用于转化的浸染液．
（4）剪取油菜的叶片放入浸染液中一段时间，此过程的目的是将目的基因导入受体细胞，进一步筛选后获得转基因油菜．
（5）用DNA-RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了转录（转录、翻译）．

Answer 1

分析 基因文库包括cDNA文库、基因组文库等．某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库．

解答 解：（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．
（2）在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．
（3）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．
（4）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入受体细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞．该细胞通过植物组织培养技术，可培育成转基因油菜植株．
（5）用DNA-RNA分子杂交技术确定融合基因是否完成了转录，产生了mRNA；用抗原-抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．
故答案为：
（1）PCR（聚合酶链式反应/多聚酶链式反应）
（2）ClaⅠDNA连接   A、D
（3）基因表达载体      四环素
（4）将目的基因导入受体细胞
（5）转录

点评 本题以增加油菜种子的含油量为材料背景，考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力．