题目内容

降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低,半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素,从预期新型降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用游离的脱氧核苷酸和Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如下图。在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。请据图回答:

(1)Klenow酶是一种                  酶,合成的双链DNA有              个碱基对。
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-GAATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-GGATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它_                              
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是__                                   
③要进行重组质粒的鉴定和选择,需要大肠杆菌质粒中含有              
(3)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是                   


(1)DNA聚合  126
(2)①繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少
②保证目的基因和载体定向连接(或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接)
③标记基因
(3)蛋白质工程。

解析试题分析:(1)Klenow酶催化了原料按照模板链通过碱基互补配对相连,故属于DNA聚合酶,合成双链后碱基对数为72×2-18=128。(2)①大肠杆菌具有繁殖快、代谢旺盛等特点;②若只用一种限制酶处理,则目的基因和载体的末端可以任意连接成环,用两种限制酶可保证目的基因和载体定向连接;③标记基因用于重组质粒的鉴定和选择。(3)由于该新型降钙素是原来没有的新蛋白质,所以运用了蛋白质工程。
考点:本题考查基因工程的应用等相关知识,意在考查考生能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力。

练习册系列答案
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苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得,为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用,许多学者做了大量研究,实验过程及实验结果如下:

①取小鼠肝癌Hepal-6细胞。
②制成单细胞悬液,等量接种于多孔板,加入等量培养液,每组设5个平行孔。
③于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h。
④加入等量不同浓度的SW溶液,于37℃、5%CO2培养箱中培养。
⑤分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液,观察记录结果,得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线如图所示。
⑥将培养48 h的培养液离心,细胞染色,在荧光显微镜下观察拍照,记录正常细胞和凋亡细胞的数目,并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况,汇总统计结果如下表。
培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达状况

SW(μg/ml)
癌细胞数目
凋亡细胞数目
Bax蛋白
Bcl-2蛋白
2
+
++++
++++
+
1
++
+++
+++
++
0.5
+++
++
++
+++
0
++++
+
+
++++
注:“+”的数量表示相对值的大小
回答下列问题:
(1)实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液,于37℃、5%CO2培养箱中培养的目的是                 。培养箱中要有适量的无菌空气,原因是              。肝癌细胞悬液中细胞有悬浮生长的特征,可能的原因是                         
(2)实验中利用多孔板培养时,每组设置5个平行孔同时进行培养,计数后统计平均值是为了                       
(3)分析图中曲线可知,SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是:①                                  ;②                                                       
(4)表中结果说明SW可以诱发细胞          ,从而抑制肿瘤细胞生长,从分子水平上分析,SW可能是导致癌细胞内              的合成量增加。

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