Question

12．如图为某种哺乳动物体细胞核移植过程图．回答下列问题．

（1）①处需要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）等处理，然后分瓶继续培养；细胞培养需要O₂和CO₂，CO₂的主要作用是维持培养液的pH．
（2）卵母细胞在体外培养到减数第二次分裂中期时进行去核．与去核卵母细胞融合的供体细胞培养一般不会超过10代，原因是10代以后的细胞遗传物质可能发生突变（或保证供体细胞正常的遗传基础）．激活受体细胞除了用电刺激的方法外，还可以用钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等．（写一种实际方法）
（3）动物细胞核移植的难度高于胚胎细胞核移植的原因是动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性十分困难．

Answer 1

分析 体细胞核移植过程：（以克隆高产奶牛为例）

注意：
①细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合，体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性．
②受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉．
③该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性．
④用卵母细胞做受体细胞原因：a．卵母细胞体积大，便于操作；b．含有促使细胞核表达全能性的物质；c．营养物质丰富
⑤克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致．

解答 解：（1）细胞贴壁后，用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理使细胞分散，制成细胞悬液．细胞培养需要提供O₂和CO₂等气体环境，CO₂的作用主要是维持培养液的pH．
（2）卵母细胞在体外培养到减数第二次分裂中期时进行去核．10代以后的细胞遗传物质可能发生突变（或保证供体细胞正常的遗传基础），因此一般选用传代10代以内的细胞应用于核移植的供体细胞．激活受体细胞可以用物理和化学方法，如电刺激、钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等．
（3）动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性十分困难，因此动物体细胞核移植的难度高于胚胎细胞核移植．
故答案为：
（1）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）      维持培养液的pH
（2）减数第二次分裂中期     10代以后的细胞遗传物质可能发生突变（或保证供体细胞正常的遗传基础）              钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等
（3）动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性十分困难

点评 本题考查动物体细胞核移植，要求考生识记动物体细胞核移植的概念及过程，利用所学的知识，准确判断图中各过程采用的技术手段．