题目内容

【题目】科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗,其技术流程如图1。图2表示目的基因及限制酶切点,图3表示质粒,据图回答:

(1)重组细胞的细胞核来自______________细胞。

(2)将基因导入ES细胞而不是导入上皮细胞是因为ES细胞具有______________。

(3)步骤③,需要构建含有干扰素基因______________。

(4)从基因组数据库中查询干扰素基因的核苷酸序列,以便根据真训练设计合成引物用于PCR扩增,PCR扩增过程至少第____________轮循环后才能获得纯目的基因片段(仅含引物之间的序列)。

(5)对于干扰素基因片段和质粒进行双酶切时,可选用限制酶的组合为____________或____________。

(6)将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达,可以采用___________的方法。

【答案】(1)(干扰素基因缺失小鼠的)上皮细胞 (2)全能性 (3)基因表达载体

(4)3(2分) (5)HindIII和PstI EcoRI和PstI (6)绿 抗原—抗体杂交

【解析】

试题分析::(1)重组细胞的细胞核来自上皮细胞

(2)将基因导入ES细胞而不是导入到上皮细胞是因为ES细胞具有全能性.

(3)步骤③是将目的基因导入ES细胞,该过程之前需要构建基因表达载体;

(4)因为前两轮循环扩增产物上目的基因上都带有模板DNA其他片段,即扩增产物比目的基因的DNA片段长,第三轮就有了纯目的基因片段了

(5)由图可知,SamⅠ酶的识别序列和切割位点位于目的基因上,用该酶切割会破坏目的基因,因此对干扰素基因片段和质粒进行酶切时,可选用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

(6)用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割时会破坏红色荧光蛋白基因,但不会破坏绿色荧光蛋白基因,因此将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察,选择发绿色荧光的细胞进行体外诱导.为检测干扰素基因是否表达,可以采用抗原-抗体杂交法

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