Question

19．番茄中含有丰富的维生素，但不耐储存．我国科学家将控制番茄果实成熟的基因导入番茄，获得转基因延熟番茄．操作流程如图：
（1）过程①需要的工具酶有限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶．在筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的标记基因的表达．
（2）为促进图中②、③培养过程的顺利完成，通常需要在培养基中加入的调节物质是生长素和细胞分裂素．
（3）要快速繁殖转基因番茄植株，目前常用的生物技术是植物组织培养．该技术的关键步骤是脱分化和再分化．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）构建基因表达载体时，需要用同一种限制性核酸内切酶处理含有目的基因的外源DNA分子和载体，以形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接构成重组质粒．筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常需要依据质粒上的标记基因的表达．
（2）②是脱分化过程、③是再分化过程，决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素在植物组织培养过程中非常重要．
（3）快速繁殖技术就是指快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，因此要快速繁殖转基因番茄植株，需采用植物组织培养技术，该技术的关键步骤是脱分化和再分化．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶（限制酶）　DNA连接酶　标记基因
（2）生长素　细胞分裂素（二者顺序可颠倒）
（3）植物组织培养　脱分化和再分化

点评 本题结合图解，考查基因工程和植物组织培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤；识记植物组织培养的过程及应用，能结合图中信息准确答题．