Question

1．纤维素酶是将纤维素水解成葡萄糖的一种复合酶，在生物燃料制作、布料处理中起重要作用．图示纤维素酶的相关提取过程，请回答：

（1）从土壤中获取纤维素分解菌时，应选择富含纤维素的环境采集土样．
（2）筛选纤维素分解菌，可采用刚果红染色法．下列关于该培养基制备的叙述错误的有BC（双选）
A．配制固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂
B．平板冷凝后需倒置的原因是让培养皿盖上的冷凝水充分落入培养基
C．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
D．培养基中能够为菌体的生长提供碳源的是淀粉和纤维素粉
（3）实验时，加入染色剂的方法有两种，方法一是先培养微生物，再加入染色剂，方法二是在倒平板时就加入染色剂．两种方法中会出现“假阳性反应”的是方法二．
（4）在对纤维素分解菌进行计数时，为选出菌落数符合要求的平板，常需要在涂布前用无菌水对样品进行稀释．若培养基被杂菌污染，通常会导致统计结果比实际数目高（填“高”或“低”），为检测培养基是否被污染，可对其进行空白培养．

Answer 1

分析 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：
（1）计算：依据是培养基配方的比例．
（2）称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取．牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖．
（3）溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL．
（4）调pH；
（5）灭菌：培养基采用高压蒸汽灭菌，培养皿采用干热灭菌．
（6）倒平板．
2、分解纤维素的微生物的分离实验的原理：
①土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长．
②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌．

解答 解：（1）筛选纤维素分解菌时土壤取样需要到富含纤维素的环境中取样．
（2）筛选纤维素分解菌，可采用刚果红染色法，其原理是：在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌．
A、配制固体培养基时可加入琼脂作为凝固剂，A正确；
B、平板冷凝后需倒置的原因是不让培养皿盖上的冷凝水落入培养基，防止造成污染，B错误；
C、操作的顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，C错误；
D、培养基中能够为菌体的生长提供碳源的是淀粉和纤维素粉，D正确．
故选：BC．
（3）实验时，加入染色剂的方法有两种，方法一是先培养微生物，再加入染色剂，方法二是在倒平板时就加入染色剂．第一种方法会使菌落之间发生混杂，第二种方法：产生淀粉酶的微生物也产生模糊的透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈．因此，两种方法中会出现“假阳性反应”的是方法二．
（4）在对纤维素分解菌进行计数时，为选出菌落数符合要求的平板，常需要在涂布前用无菌水对样品进行稀释；若培养基被杂菌污染，通常会导致统计结果比实际数目高；为检测培养基是否被污染，可对其进行空白培养．
故答案为：
（1）富含纤维素
（2）刚果红染色     BC
（3）倒平板         方法二
（4）无菌水         高            空白培养

点评 本题结合图示主要考查微生物的筛选、培养、鉴定等知识，要求考生识记纤维素分解菌分离实验的原理；识记制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤；识记微生物计数等知识，能结合所学的知识准确答题．