Question

10．据报道，从部分企业生产的速冻食品中检出葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注．葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环．请回答下列问题．
（1）某兴趣小组欲检测某果汁类食品中含有葡萄球菌，请帮他们完善下列步骤．
①配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节pH，分装到锥形瓶后进行高压蒸汽灭菌，在无菌状态下加入卵黄液（100mL10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀）摇匀后立即倒平板．
②接种：取待检测果汁2.5mL加入22.5mL灭菌生理盐水中，制成接种样液．
实验组：将接种样液用平板划线法接种在含卵黄的固体培养基上．
对照组：将无菌生理盐水用划线法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作为空白对照．
将上述接种后的培养皿同时放在36℃的恒温箱中培养48h．
③观察：观察培养基表面是否出现周围有乳浊环的菌落．
（2）培养基中的牛肉膏和蛋白胨为葡萄球菌生长和繁殖提供碳源和氮源．
葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl溶液，所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl溶液可以将它分离出来，此培养基属于选择培养基．
（3）若要统计某土壤样品中该活菌数目，宜采用稀释涂布平板法法，将0.2mL样品稀释100倍，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为10⁵ 个/mL，该统计结果低于 （填“低于”或“高于”）实际值．

Answer 1

分析 1、无菌技术：消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
3、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

解答 解：（1）①配制培养基时，分装之后要进行灭菌处理，而对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法．
②根据实验的单一变量原则，对照组使用平板划线法，则实验组也要采用平板划线法；空白对照组不接种，或将25ml无菌生理盐水接种在含卵黄的固体培养基上．
③葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环．因此，观察时，应该观察培养基表面是否出现周围有乳浊环的菌落．
（2）牛肉膏和蛋白胨中含有蛋白质，故能为葡萄球菌的生长和繁殖提供碳源和氮源；高浓度的NaCl溶液可以把葡萄球菌分离出来，故该培养基属于选择培养基．
（3）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于计数活菌数目．根据题意可知，每克土壤中该细菌的含量为（200+180+220）÷3×$\frac{1}{0.2}$×100=10⁵．由于2个或多个细菌连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，因此该方法统计结果低于实际值．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌　平板划线　无菌生理盐水      空白　是否出现周围有乳浊环的菌落
（2）碳源和氮源　选择
（3）稀释涂布平板法　10⁵　低于

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的基本成分、种类及功能；识记无菌技术及实例；识记接种微生物常用的两种方法及微生物的计数方法，能结合所学的知识准确答题．