题目内容
为了从泡菜汁中筛选分离出发酵产酸速度快、亚硝酸盐降解能力强的乳酸菌,科研人员做了如下实验(实验室中常用MRS培养基培养乳酸菌,在加入CaCO3的MRS培养基中,菌落周围能形成透明圈)。
请回答问题:
(1)在无菌操作下,使用无菌水对泡菜汁进行_________,将不同稀释度的泡菜汁涂布于添加了CaCO3的乳酸细菌培养基(MRS培养基)平板上。在适宜条件下培养后,挑取有________ _的菌落,立即继续在MRS平板上用________法分离,得到单菌落。
(2)加入CaCO3的MRS培养从功能上看属于________培养基。取分离到的乳酸菌接入MRS液体培养基中,间隔取样测定pH,目的是筛选出_______________的乳酸菌。
(3)取上一步筛选出的乳酸菌接入含有NaNO2的MRS培养基中,培养一段时间后,用比色方法测定NaNO2的含量,筛选出_____________的菌株。
(4)乳酸菌细胞结构的最主要特点是___________,其代谢类型为__________。
((1)(2)每空2分,(3)(4)每空1分,共13分)
(1)梯度稀释 透明圈 平板划线
(2)鉴别 产酸速度较快
(3)亚硝酸盐降解能力强
(4)没有核膜包围的细胞核 异养厌氧型
解析试题分析:(1)首先对泡菜汁进行梯度稀释才能形成不同稀释度的泡菜汁,因为在加入CaCO3的MRS培养基中,菌落周围能形成透明圈所以要挑去有透明圈的菌落,然后用平板划线法分离提纯。
(2)从功能上该培养基是鉴别培养基,想要的目的菌是产酸速度快,亚硝酸盐降解能力强的菌种,故测定pH是筛选出产酸速度较快的乳酸菌。
(3)亚硝酸盐的测定用比色法,故筛选的是亚硝酸盐降解能力强的菌株。
(4)乳酸菌是原核生物最主要的特点是没有核膜包围的细胞核,它是异养厌氧型生物。
考点:本题考查微生物的培养与分离相关知识,意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度及对知识点间综合把握运用能力。
请回答下列与大肠杆菌有关的问题:
(1)从生态系统的成分上看,大肠杆菌属于 ;它的同化作用类型是 。
(2)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
| 成分 | 含量 |
| 蛋白胨 | 10.0g |
| 乳糖 | 5.0g |
| 蔗糖 | 5.0g |
| K2HPO4 | 2.0g |
| 显色剂 | 0.2g |
| 琼脂 | 12.0g |
| 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL | |
(3)在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需要对培养基和培养皿进行 (消毒、灭菌),操作者的双手需要进行清洗和 。空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能 。培养大肠杆菌时,常用的接种方法是平板划线法和 。通常,对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 。若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
(4)以下微生物发酵生产特定产物时,所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是 。
A.制作果酒 B.由果酒制作果醋 C.制作泡菜 D.制作腐乳
(5)利用培养基不仅可以分离、培养微生物,也可以进行植物组织培养。在植物组织培养的过程中,也要对外植体等进行一系列的消毒、灭菌处理,并且要求无菌操作,原因是 。
(9分)请回答下列有关温度与酶活性的问题:
(1)温度对唾液淀粉酶活性影响的实验:
将盛有2mL唾液淀粉酶溶液的试管和盛有2mL可溶性淀粉溶液的试管编为一组,共四组。在0℃、20℃、37℃和100℃水浴中各放入一组,维持各自的温度5min。然后,将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中,摇匀后继续放回原来的温度下保温。把________的时间作为本实验的起始时间记录下来。再每隔一分钟,取一滴混合液滴在盛有碘液的点滴板上进行观察,记录每种混合液蓝色消失的时间。通过比较混合液中____消失所需时间的长短来推知酶的活性。预计___温度下混合液因其中的酶失去活性蓝色不会消失。
(2)温度对酶活性的影响主要体现在两个方面。其一,随温度的升高会使___接触的机会增多,反应速率变快。其二,因为大多数酶是蛋白质,随温度升高____会发生改变,温度升到一定程度,酶将完全失活。这两种作用叠加在一起,使酶促反应在某一温度下最快,这一温度就是该酶的__。
(3)科研人员通过蛋白质工程来设计改变酶的构象。在研究溶菌酶的过程中,得到了多种突变酶,测得酶50%发生变性时的温度(Tm),部分结果见下表:
| 酶 | 半胱氨酸(Cys)的位置和数目 | 二硫键数目 | Tm/℃ |
| 野生型T4溶菌酶 | Cys51,Cys97 | 无 | 41.9 |
| 突变酶C | Cys21,Cys143 | 1 | 52.9 |
| 突变酶F | Cys3,Cys9,Cys21,Cys142,Cys164 | 3 | 65.5 |
溶菌酶热稳定性的提高,是通过改变__和增加___得以实现的。从热稳定性高的酶的氨基酸序列出发,利用___方法获得目的基因,通过基因工程的手段,可以生产自然界中不存在的蛋白质。