Question

2．内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽．内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应．ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究奠定基础．其过程如图（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG）．请分析回答：

（1）完成过程①需要的酶是逆转录酶．
（2）过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是．用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是可以使目的基因定向连接到载体上．
（3）过程④中需要DNA连接酶，去构建重组质粒．过程⑥中，要用Ca²⁺（或CaCl₂）预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界的DNA．
（4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是检测ET_A基因能否表达及表达量．
（5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加．美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释原因：ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

分析 分析图形：123表示反转录法获得目的基因的过程，4表示构建基因表达载体，5表示限制酶切割质粒，6表示重组质粒导入受体细胞，7表示目的基因的检测，以此分析答题

解答 解：（1）图中1过程是逆转录过程，需要逆转录酶的催化；与过程2相比，该过程特有的碱基配对方式是U-A．
（2）过程3利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是-AGCT（或）．图中显示利用了两种限制酶切割目的基因和载体，从而获得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向连接到载体上．
（3）基因表达载体构建构成中，需要用DNA连接酶连接目的基因和质粒．过程6重组质粒导入受体细胞的过程，要用Ca²⁺（或CaCl₂）预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态．
（4）利用SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，可以检测ET_A基因能否表达及表达量．
（5）ET_A能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合，抑制了内皮素对黑色素细胞的增值和黑色素的形成，从而达到美容的目的．
故答案为：
（1）逆转录酶
（2）磷酸二酯                                   可以使目的基因定向连接到载体上
（3）DNA连接酶                    Ca²⁺（或CaCl₂）
（4）检测ET_A基因能否表达及表达量  
（5）ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合

点评 本题结合转基因香蕉形成的流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能结合图中信息准确答题．