Question

如图是将目的基因导入动物细胞，培育转基因动物的常用操作程序．根据图示过程和所学知识，将下面操作程序补充完整．

（1）构建基因表达载体：在构建基因表达载体时常要用到工具酶．常用的DNA连接酶有

 

和

 

，后者也可以用于平末端的连接．如果目的基因要在乳腺细胞中表达，基因表达载体构建时要将目的基因与

 

、标记基因和终止子等组件重组在一起，载体一般要有一至多个限制酶切割位点便于

 

．
（2）获得足够数量的受精卵：为了获得足够数量的受精卵，先利用

 

刺激供体雌性鼠超数排卵，然后从

 

冲取

 

，再完成体外受精．
（3）将目的基因导入细胞：确定目的基因是否整合到染色体上，一般需用

 

做探针，与转基因小鼠细胞中提取的

 

进行DNA分子杂交．
（4）早期胚胎培养：早期胚胎培养的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加

 

、

 

，氨基酸、核苷酸等营养成分，以及动物血清等物质．当胚胎培养到适宜的阶段时，可进行胚胎移植．
（5）胚胎移植：在胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行

 

处理．移植后，还要对受体雌鼠进行

 

检查．
（6）胚胎干细胞形态上具有

 

的特性，它在添加

 

的培养液中可以维持不分化的状态．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,胚胎移植

专题：

分析：图示为转基因动物的培育过程，据图分析可知：先将小鼠超数排卵处理，体内受精后（雌雄原核）获得受精卵，然后用显微注射技术将目的基因注入受体细胞，再经过胚胎移植技术，将早期转基因的胚胎发育成转基因动物，据此答题即可．

解答： 解：（1）在构建基因表达载体时，常用的DNA连接酶有E?coliDNA连接酶（大肠杆菌DNA连接酶）、T₄-DNA连接酶，二者均可以连接粘性末端，其中T₄-DNA连接酶还可以连接平末端；如果目的基因要在乳腺细胞中表达，需将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子结合，基因表达载体上还需标记基因和终止子等组件，载体一般要有一至多个限制酶切割位点便于插入目的基因．
（2）为了获得足够数量的受精卵，常用促性腺激素处理供体雌鼠，使其超数排卵，从输卵管中冲取卵子（卵母细胞），再完成体外受精即可．
（3）确定目的基因是否整合到染色体上，一般需用放射性同位素标记（荧光分子标记）的目的基因（单链），与转基因小鼠细胞中提取的基因组DNA（核DNA），进行DNA分子杂交，通过是否产生杂交链来检测．
（4）早期胚胎培养的培养液成分，除无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，并需添加动物血清等天然成分．  
（5）在胚胎移植前，为了使胚胎移植前后处于相同的生理状态，要对接受胚胎的受体进行同期发情处理；移植后，要对受体雌鼠进行是否妊娠检查．
（6）胚胎干细胞具有体积小，细胞核大，核仁明显等特点，添加抑制分化的因子可以只分裂不分化．
故答案为：
（1）E?coliDNA连接酶（大肠杆菌DNA连接酶） T₄-DNA连接酶   乳腺蛋白基因的启动子  目的基因的插入
（2）促性腺激素       输卵管       卵子（卵母细胞）
（3）放射性同位素标记（荧光分子标记）的目的基因（单链）    基因组DNA（核DNA）
（4）维生素      激素     
（5）同期发情     妊娠
（6）体积小，细胞核大，核仁明显   抑制因子

点评：本题考查基因工程、胚胎移植等知识，结合体内、体外受精进行考察，意在考查考生对所学知识的掌握、获取图文信息能力和分析推理能力的培养．