题目内容
【题目】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过PCR技术扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，引物1和引物2分别与MT基因两端的序列互补。下列表述正确的是
A. 引物1和引物2的序列相同，且序列已知
B. 步骤1需要解旋酶，步骤2需要耐高温的DNA聚合酶，步骤3需要DNA连接酶
C. n个循环后，扩增出的所需要的目的基因的分子数是2n
D. 为方便构建重组质粒，可在引物中设计适当的限制性核酸内切酶位点
【答案】D
【解析】
PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制，需要条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），过程包括：①高温变性：DNA解旋过程，高温条件下氢键可自动解开；②低温退火：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链；据图分析，图中步骤1、2、3分别代表变性、退火、延伸，据此分析。
A. PCR中，根据一段模板DNA序列，设计互补的寡核苷酸链做引物，故引物1和引物2的序列不相同，A错误；
B. PCR的第一步是加热高温DNA变性，也就是DNA的解旋，因为有高温破坏氢键，所以无须解旋酶的参与，故步骤1需要解旋酶，PCR不需要DNA连接酶，B错误；
C. n个循环后，扩增出的DNA分子数是为2n个，但符合需要的目的基因的分子数少于2n个，C错误；
D. 获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒上，因此在引物中设计适当的限制性核酸内切酶位点可以使后续的连接过程简单、可控，D正确。
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