题目内容
回答下列有关基因工程的问题
最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体（见图1）．AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏复制激活基因E，所以，AAV感染细胞后不会复制，对人体安全．当人体细胞同时感染其他DNA病毒（含有基因E）后，会激活复制、表达，形成病毒粒子（含DNA和衣壳），病毒粒子具有侵染能力．AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子．
血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子，导致机体出血．目前血友病的临床治疗主要有两种基因疗法，一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内，补充凝血因子；二是用含目的基因的重组病毒感染患者，使患者获得病毒直接提供的凝血因子．
（1）在质粒重组之前需获取大量的目的基因等，实验室最常见的方法是（写中文全称） ．
（2）过程①②需要限制酶外，还需要 酶．
（3）重组AAV中去除了基因rep、cap，此举的目的是 ；重组AAV转染细胞产生病毒粒子，需要人工重组辅助质粒，这是因为 ．
（4）比较两种基因治疗法，说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点： ．
（5）实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明 ．
（6）病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒，就需要检验、提纯，检验可以用酶切结合电泳法．已知腺相关病毒（AAV）与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图2所示，两种酶分开切的电泳图如图3所示
则用这两种酶作用于重组AAV，（如图4）电泳图正确的是 ．
最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体（见图1）．AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏复制激活基因E，所以，AAV感染细胞后不会复制，对人体安全．当人体细胞同时感染其他DNA病毒（含有基因E）后，会激活复制、表达，形成病毒粒子（含DNA和衣壳），病毒粒子具有侵染能力．AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子．
血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子，导致机体出血．目前血友病的临床治疗主要有两种基因疗法，一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内，补充凝血因子；二是用含目的基因的重组病毒感染患者，使患者获得病毒直接提供的凝血因子．
（1）在质粒重组之前需获取大量的目的基因等，实验室最常见的方法是（写中文全称）
（2）过程①②需要限制酶外，还需要
（3）重组AAV中去除了基因rep、cap，此举的目的是
（4）比较两种基因治疗法，说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点：
（5）实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明
（6）病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒，就需要检验、提纯，检验可以用酶切结合电泳法．已知腺相关病毒（AAV）与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图2所示，两种酶分开切的电泳图如图3所示
则用这两种酶作用于重组AAV，（如图4）电泳图正确的是
考点：基因工程的原理及技术
专题：
分析：基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导人受体细胞，④目的基因的检测与鉴定．
解答：
解：（1）获取大量的目的基因的常用方法是聚合酶链反应．
（2）过程①②为基因基因表达载体的构建，需要限制酶和DNA连接参与．
（3）rep为病毒衣壳基因、cap为病毒复制相关蛋白基因，重组病毒去除这两种基因后不能在人体大量复制，提高安全性，又因为AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子，所以去除后保证AAV能结合较大目的基因片段；由图可知，重组AAV中没有cap和rep基因，所以需要人工重组辅助质粒参与提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因．
（4）结合图形可知，凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射．
（5）在不同的生物体细胞中，相同的重组AAV转染都能获得相同的蛋白质，说明生物共用一套遗传密码．
（6）根据题意，两种酶都使用可将重组AAV切割成四段，且总DNA片段长度为1230pp，故选：B．
故答案为：
（1）聚合酶链反应
（2）DNA连接
（3）重组AAV不能在人体大量复制，提高安全性，并保证AAV能结合较大目的基因片段 辅助质粒能提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因
（4）凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射
（5）生物共用一套遗传密码子
（6）B
（2）过程①②为基因基因表达载体的构建，需要限制酶和DNA连接参与．
（3）rep为病毒衣壳基因、cap为病毒复制相关蛋白基因，重组病毒去除这两种基因后不能在人体大量复制，提高安全性，又因为AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子，所以去除后保证AAV能结合较大目的基因片段；由图可知，重组AAV中没有cap和rep基因，所以需要人工重组辅助质粒参与提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因．
（4）结合图形可知，凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射．
（5）在不同的生物体细胞中，相同的重组AAV转染都能获得相同的蛋白质，说明生物共用一套遗传密码．
（6）根据题意，两种酶都使用可将重组AAV切割成四段，且总DNA片段长度为1230pp，故选：B．
故答案为：
（1）聚合酶链反应
（2）DNA连接
（3）重组AAV不能在人体大量复制，提高安全性，并保证AAV能结合较大目的基因片段 辅助质粒能提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因
（4）凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射
（5）生物共用一套遗传密码子
（6）B
点评：本题考查基因工程内容，意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．
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