回答下列有关基因工程的问题最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒作为治疗用基因载体．AAV是有衣壳.无包膜的DNA小病毒.基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap.以及其他基因.但缺乏复制激活基因E.所以.AAV感染细胞后不会复制.对人体安全．当人体细胞同时感染其他DNA病毒后.会激活复制.表达.形成病毒粒子.病毒� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

回答下列有关基因工程的问题
最新基因医疗工程主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体（见图1）．AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏复制激活基因E，所以，AAV感染细胞后不会复制，对人体安全．当人体细胞同时感染其他DNA病毒（含有基因E）后，会激活复制、表达，形成病毒粒子（含DNA和衣壳），病毒粒子具有侵染能力．AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子．
血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子，导致机体出血．目前血友病的临床治疗主要有两种基因疗法，一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内，补充凝血因子；二是用含目的基因的重组病毒感染患者，使患者获得病毒直接提供的凝血因子．

（1）在质粒重组之前需获取大量的目的基因等，实验室最常见的方法是（写中文全称）

．
（2）过程①②需要限制酶外，还需要

酶．
（3）重组AAV中去除了基因rep、cap，此举的目的是

；重组AAV转染细胞产生病毒粒子，需要人工重组辅助质粒，这是因为

．
（4）比较两种基因治疗法，说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点：

．
（5）实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明

．
（6）病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒，就需要检验、提纯，检验可以用酶切结合电泳法．已知腺相关病毒（AAV）与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图2所示，两种酶分开切的电泳图如图3所示

则用这两种酶作用于重组AAV，（如图4）电泳图正确的是

．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导人受体细胞，④目的基因的检测与鉴定．

解答： 解：（1）获取大量的目的基因的常用方法是聚合酶链反应．
（2）过程①②为基因基因表达载体的构建，需要限制酶和DNA连接参与．
（3）rep为病毒衣壳基因、cap为病毒复制相关蛋白基因，重组病毒去除这两种基因后不能在人体大量复制，提高安全性，又因为AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子，所以去除后保证AAV能结合较大目的基因片段；由图可知，重组AAV中没有cap和rep基因，所以需要人工重组辅助质粒参与提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因．
（4）结合图形可知，凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射．
（5）在不同的生物体细胞中，相同的重组AAV转染都能获得相同的蛋白质，说明生物共用一套遗传密码．
（6）根据题意，两种酶都使用可将重组AAV切割成四段，且总DNA片段长度为1230pp，故选：B．
故答案为：
（1）聚合酶链反应
（2）DNA连接
（3）重组AAV不能在人体大量复制，提高安全性，并保证AAV能结合较大目的基因片段        辅助质粒能提供腺相关病毒（AAV）复制所用酶以及衣壳蛋白的基因
（4）凝血因子进入人体内，由于代谢而导致数量下降，必须不断注射，而病毒所携带的目的基因能在患者体内长期生产凝血因子，不需要经常注射
（5）生物共用一套遗传密码子
（6）B

点评：本题考查基因工程内容，意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．