如表是几种限制酶识別序列及其切割位点.图1.图2标注相关限制酶的酶切位点.其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题:限制酶BamHⅠBclⅠSau3AⅠHindⅢ识别序列及切割位点(1)质粒作为基因工程的载体.除了图1中所示的结构条件外.还需要具备终止子.复制原点．用图中质粒和目的基因构建重组质粒.应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶切割．若用Sau3A I切图1质� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

5．如表是几种限制酶识別序列及其切割位点，图1、图2标注相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注．请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点

（1）质粒作为基因工程的载体，除了图1中所示的结构条件外，还需要具备终止子、复制原点．用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用BclⅠ和HindⅢ两种限制酶切割．若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素．
（3）为了在体外扩增目的基因，可采用聚合酶链式反应，该反应体系需要模板、缓冲液、引物、dNTP和Taq酶．为获得图2中的目的基因，所用的引物不会是引物乙，引物在退火阶段，与DNA模板按碱基互补配对原则结合．

分析解答本题的关键在于理解重组质粒中标记基因的作用．选择限制酶需注意插入目的基因时不能破坏标记基因．PCR扩增基因时，两种引物结合的部位相反，延伸的方向相反．限制酶具有特异性，不同的限制酶识别不同的序列，判断某种限制酶能否切割片断，应该据该片段中是否含有限制酶的识别序列．
根据题意和图示分析可知：在质粒上存在BamH I、BclⅠ、BamH I和HindⅢ等四个酶切位点，其中BamH I的切割位点在两个抗性基因上都有，而抗性基因为载体的标记基因，因此不可用该酶切割．在目的基因上，BclⅠ、BamH I、HindⅢ和Sau3AⅠ四种酶也存在酶切位点．

解答解：（1）质粒作为基因工程的载体，需要具有启动子、终止子、标记基因、复制原点等条件，图1中具有启动子和标记基因．选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．根据BamHⅠ、BclI和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段．
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素．
（3）为了在体外扩增目的基因，可采用聚合酶链式反应，该反应体系需要模板、缓冲液、引物、dNTP和Taq酶．PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙．引物在退火阶段，与DNA模板按碱基互补配对原则结合．
故答案为：
（1）终止子、复制原点 BclⅠ和HindⅢ7
（2）四环素
（3）聚合酶链式 Taq酶引物乙碱基互补配对

点评本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲应用和理解层次的考查．

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	A．	图中甲可能是人体胃癌细胞的特异性抗原
	B．	用特定的选择培养基对乙筛选，融合细胞均能生长，未融合细胞均不能生长
	C．	丙、丁分别表示杂交瘤细胞和能分泌抗胃癌抗体的杂交瘤细胞
	D．	丁的大规模培养可以在培养基中进行，也可以在小鼠腹腔内进行

18．如图为人体内某种化合物的结构组成模式图，以下物质或结构中最可能含有该种分子的是（　　）

14．下列对细胞生命历程及细胞器的叙述中，正确的是（　　）

	A．	随细胞的衰老，细胞内的色素（如黑色素）逐渐积累而形成“老年斑”
	B．	细胞生命历程包括细胞增殖、分化、衰老、凋亡和癌变
	C．	细胞分化使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率
	D．	植物光合作用有关的色素可分布于叶绿体和液泡中

1．科学家研究发现，生物体中多种结构或物质存在螺旋现象，下列有关说法正确的是（　　）

	A．	大肠杆菌细胞分裂时，可见染色质螺旋化形成的染色体
	B．	沃森和克里克通过电子显微镜直接观察发现DNA双螺旋结构
	C．	多肽链组成相同，但盘曲方式不同的蛋白质功能不一定相同
	D．	水绵的叶绿体呈螺旋式带状，可作为观察细胞质流动的标志物

10．请回答有关物质提取、微生物培养与应用的问题：
（1）实验室分离叶绿体中的色素常用的方法是纸层析法；从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是萃取法．
（2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵．常用的对培养皿进行灭菌的方法是干热灭菌法．
（3）从土壤中分离尿素分解菌的过程中，应向以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂．
（4）纯化菌种和统计某活菌的数目时，宜采用的接种方法是稀释涂布平板法，用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，其原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．

17．用同位素标记法追踪元素及物质的去向是生物学的重要手段之一．下列相关结果正确的是（　　）

	A．	小白鼠吸入¹⁸O₂后呼出的二氧化碳不会含有¹⁸O
	B．	用¹⁸0标记的CO₂探明了光合作用释放的0₂来源于CO₂
	C．	要得到³²P标记的噬菌体，可直接用含有³²P的培养基培养噬菌体
	D．	用含³H-胸腺嘧啶脱氧核苷酸的营养液培养洋葱根尖，可以在细胞核和线粒体处检测到较强的放射性

13．下列有关植物细胞呼吸作用的叙述，正确的是（　　）

	A．	分生组织细胞的呼吸速率通常比成熟组织细胞的小
	B．	若细胞既不吸收O₂也不放出CO₂，说明细胞已停止无氧呼吸
	C．	适当降低氧浓度可降低果实的有氧呼吸进而减少有机物的消耗
	D．	利用葡萄糖进行有氧呼吸时，吸收O₂与释放CO₂的摩尔数不同

人体神经细胞与肝细胞的形态结构和功能不同，其根本原因是这两种细胞的（）

A．DNA碱基排列顺序不同 B．核糖体不同

C．转运RNA不同 D．信使RNA不同

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