Question

8．某动物能产生的一种有高利用价值的蛋白质，但产量较低．研究人员利用基因工程等技术，将该蛋白质的基因导入某双子叶植物体内，发现该基因在根部有较高的表达效应．
请回答下列相关问题：
（1）研究人员以动物体内该蛋白质的mRNA为模板，经反转录产生的cDNA作为目的基因．在构建基因表达载体时，在目的基因首端一定要有启动子序列，尾端要有终止子 序列，才能使目的基因正常转录．
（2）将目的基因导入该植物细胞，可用农杆菌转化法，该方法能使Ti质粒上的T-DNA将目的基因插入到植物细胞的染色体上．
（3）若要检测该目的基因在植物体内的表达最终产物，应该取植物的根部细胞，提取蛋白质，利用抗原-抗体杂交技术进行检测，如果出现杂交带，则表明目的基因成功表达．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）目的基因的获取可通过反转录法，即以蛋白质的mRNA为模板，经反转录产生的cDNA作为目的基因．基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，一个表达载体的组成，除了目的基因外，还有启动子、终止子和标记基因等，因此在构建基因表达载体时，在目的基因首端一定要有启动子序列，尾端要有终止子序列，才能使目的基因正常转录．
（2）将目的基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体上．
（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质常用抗原-抗体杂交技术．若要检测该目的基因在植物体内的表达最终产物，应该取植物的根部细胞，提取蛋白质，利用抗原-抗体杂交技术进行检测，如果出现杂交带，则表明目的基因成功表达．
故答案为：
（1）cDNA    启动子    终止子
（2）农杆菌转化    T-DNA
（3）根部    抗原-抗体杂交    杂交带

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．