Question

8．抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗．下图为培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程．回答问题：

（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的碱基对序列，获得目的基因的方法是以从基因文库中获取或利用PCR技术扩增，扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因经常采用PCR技术技术．构建基因表达载体所用的工具酶有限制酶、DNA连接酶．
（2）过程①是将目的基因导入受体细胞，该过程常用的方法是显微注射法．选择受精卵作为目的基因的受体细胞的主要原因是受精卵的全能性最高；过程②包括早期胚胎培养（或“动物细胞培养”） 技术和胚胎移植技术；可用
胚胎分割技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊．
（3）对胚胎进行分割移植时，胚胎应发育到桑葚胚或囊胚阶段．胚胎在受体内存活的原因，可能是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应．对受体动物的处理是用促性腺激素对受体进行同期发情处理．
（4）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗体杂交技术．
（5）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端和端的启动子和终止子没有设计好，应从这方面考虑改善．

Answer 1

分析 获得目的基因的方法：①从基因文库中获取：②利用PCR技术扩增：③人工合成：这种方法有两条途径，一是以目的基因转录的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，再在酶的作用下合成双链DNA，即目的基因；另一条途径是蛋白质的氨基酸序列，推测出信使RNA序列，再推测出结构基因的核苷酸序列，然后用化学的方法以单核苷酸为原料合成．

解答 解：（1）已知抗凝血酶Ⅲ蛋白基因的碱基对序列，可以从基因文库中获取或利用PCR技术扩增获取目的基因，利用PCR技术能在体外大量扩增目的基因（抗凝血酶Ⅲ蛋白基因）．基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶切割目的基因和运载体，DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒．
（2）过程①是将目的基因导入受体细胞，常用的方法是显微注射法．利用PCR技术能扩增抗凝血酶Ⅲ蛋白基因．过程②是受精卵需要经过早期胚胎培养技术和胚胎移植技术，可用胚胎分割技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊．
（3）胚胎移植时，受体应处于适合的生理状况，此时可利用促性腺激素对受体进行同期发情处理．此外，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能．一般等到胚胎发育到桑葚胚或囊胚时，进行胚胎移植．
（4）若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，这属于翻译水平的检测，可采用抗原-抗体杂交技术．
（5）基因表达载体由启动子、终止子、标记基因和目的基因组成．启动子位于首端，终止子位于尾端．
故答案为：
（1）以从基因文库中获取或利用PCR技术扩增    PCR技术    限制酶  DNA连接酶
（2）将目的基因导入受体细胞   显微注射法  受精卵的全能性最高  早期胚胎培养（或“动物细胞培养”）  胚胎分割
（3）桑葚胚或囊胚     免疫排斥反应   促性腺激素对受体
（4）抗原-抗体杂交
（5）启动子和终止子

点评 本题考查基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记胚胎移植的基本程序和胚胎分割技术的特点，能结合所学的知识准确答题．