Question

14．生活饮用水巳经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物．供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染．因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的．我国生活饮用水水质标准（GB5749-85）中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠菌群不得大于3个/L．
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为稀释涂布平板法．
（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？需要为什么？因为需要判断培养基是否被污染
（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为161、155、158、170，则每升原水样中大肠杆菌数为1.61×10⁸．
（4）纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，不可（可/不可）用加入抗生素的方法防止杂菌感染．
（5）如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是C．

A．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B．步骤②接种环火焰上灼烧后迅速沾取菌液后平板划线
C．步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤④培养箱培养后可用来对X细菌进行计数
（6）下列有关微生物培养的叙述错误的是A．
A．在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌
B．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源
C．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数
D．酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用．

Answer 1

分析 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞．
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数．此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数．

解答 解：（1）对微生物的分离常用稀释涂布平板法和平板划线法进行接种，但稀释涂布平板法适用于微生物的计数．
（2）由于需要判断培养基是否被污染，所以用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组．
（3）每升原水样中大肠杆菌数为：（161+155+158+170）÷4×1000×10³=1.61×10⁸个．
（4）纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，不可用加入抗生素的方法防止杂菌感染．
（5）据图示可知，①是倒平板，②是用接种环沾取菌液，③是进行平板划线，④是培养．
A、倒完平板后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，A错误；
B、步骤②接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以沾取菌液后平板划线，B错误；
C、步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；
D、步骤④培养箱培养后可用来对X细菌进行分离得到纯种，D错误．
故选：C．
（6）A、在对微生物进行培养前，需要对除微生物外的培养基和所有用具进行灭菌或消毒，A错误；
B、筛选尿素分解菌需要使用以尿素作为培养基中唯一的氮源的选择培养基，B正确；
C、测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数，C正确；
D、酒精具有杀菌和抑菌作用，酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用，D正确．
故选：A．．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法
（2）需要    因为需要判断培养基是否被污染
（3）1.61×10⁸
（4）高压蒸汽灭菌    不可
（5）C
（6）A

点评 本题旨在考查微生物的分离和培养、某种微生物数量的测定和培养基对微生物的选择利用，意在考查具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理，具有对一些生物学问题进行初步探究的能力．