图甲、乙中的箭头表示三种限制性核酸内切酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是(??? )

A．图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有4个游离的磷酸基团

B．在构建重组质粒时，可用PstⅠ和BamHⅠ切割质粒和外源DNA

C．用PstⅠ和HindⅢ酶切，加入DNA连接酶后可得到1种符合要求的重组质粒

D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长

质粒是常用的基因工程载体。下图是某种天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(标示了部分基因及部分限制酶的作用位点)，据图分析下列说法正确的是(??? )

A．图中的终止子是由三个相邻碱基组成的终止密码

B．用农杆菌转化法可将该质粒构建的表达载体导入动物细胞

C．用限制酶Ⅰ和DNA连接酶改造后的质粒无法被限制酶Ⅱ切割

D．用限制酶Ⅱ处理能防止该质粒构建的表达载体引起植物疯长

如图表示利用棉花叶肉细胞进行原生质体培养的过程，据图分析不正确的是(??? )

A．①过程是在0.5～0.6 mol/L的甘露醇溶液环境下用纤维素酶和果胶酶处理

B．②过程表示原生质体在培养基提供的特定条件下形成愈伤组织，此过程叫做再分化

C．③过程中以适当配比的营养物质和生长调节剂进行诱导

D．该过程体现了植物细胞的全能性

某研究小组为测定药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行细胞培养。下列说法正确的是(??? )

A．在利用两种肝组织块制备肝细胞悬液时，也可用胃蛋白酶处理

B．细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸

C．甲、乙细胞在持续的培养过程中，乙会出现停止增殖的现象

D．仅用培养肝细胞的培养液也能用来培养乙肝病毒

关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是(??? )

A．动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同

B．动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶

C．烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可离体培养增殖

D．动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒

如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述正确的是(??? )

A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞

B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成

C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性

D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群

科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，请据图回答：

(1)过程①所需要的酶是________。

(2)在构建基因表达载体的过程中，应用限制酶______切割质粒，用限制酶______切割目的基因。用限制酶切割目的基因和载体后形成的黏性末端通过__________________原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是

________________________________________________________________________。

(3)在过程③中一般将受体大肠杆菌用________________进行处理，以增大____________的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

(4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果(圆点表示菌落)，该结果说明能够生长的大肠杆菌中已导入了____________________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b所示的结果(圆圈表示与图a中培养基上对照无菌落的位置)。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是__________________________，这些大肠杆菌中导入了________________。

(5)人体的生长激素基因能在大肠杆菌体内成功表达是因为______________________。目的基因导入大肠杆菌中后表达的过程是______________________________________。

植物组织培养是克隆植物的一种方法，其过程如图所示，据图回答下列问题。

(1)为了获得脱毒植株，外植体往往取自植物的花芽、叶芽等处的分生组织，其原因是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)培养皿中的培养基中除需添加营养物质外，还需要添加植物激素，其目的是诱导外植体________________。

(3)在生产实践中为获得大量的细胞产物，如紫杉醇，可将①______________放入液体培养基中，经机械作用分散成单个细胞，制备成细胞悬浮液，再经过____________即可获得大量细胞。

(4)植物组织培养过程需要在植物生长和繁殖的最适条件下进行，否则在光学显微镜下可能观察到细胞的______________________发生了异常，进而导致植物性状遗传不稳定甚至出现不育。

(5)植物组织培养技术不仅应用于花卉和果树的快速大量繁殖以及脱毒植株的获取，还广泛应用于______________________、______________、____________等育种过程。

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：

据图回答下列问题：

(1)过程①所需的酶是______________________________________________________。

(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。

资料1? 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，同时AOX1基因也会因受到诱导而表达[5’AOX1和3’AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。

资料2? 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。

(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上________、_______限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

(2)酶切获取HBsAg基因后，需用________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取________________。

(3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用__________________方法进行检测。

(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。

(6)与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行________并分泌到细胞外，便于提取。