15、① 将从细胞中提取分离出的目的基因作为模板转录成单链双链DNA;② 据蛋白质中氨基酸序列中碱基序列DNA碱基序列目的基因。

(2)将目的基因和质粒结合形成重组质粒的过程是:① 用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个有粘性末端的切口;② 用同种限制酶切割目的基因,产生相同的粘性末端;③ 将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处,再加入适量的DNA连接酶,使质粒与目的基因结合成重组质粒。

(3)检测质粒或重组质粒是否导入受体细胞,均需利用质粒上某些标记基因的特性。即对已经做了导入处理的、本身无相应特性的受体细胞进行检测,根据受体细胞是否具有相应的特性来确定。抗氨苄青霉素基因在质粒A80重组质粒上,因为目的基因插入了四环素抗性基因的a处,所以用含氨苄青霉素这种选择培养基培养经导入质粒处理的受体细胞。凡能生长的则表明质粒导入成功;不能生长的则无质粒导入。

(4)抗四环素基因不仅在质粒A上,而且它的位置正是目的基因插入之处,因此当目的基因插入质粒A形成重组质粒时,此处的抗四环素基因的结构和功能就会被破坏,含重组质粒的受体细胞就不能在含四环素的培养基上生长,而质粒A上无目的基因插入的四环素基因结构是完整的,这种受体细胞就能在含四环素的培养基上生长。

(5)基因成功表达的标志是受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质,即人的生长激素。

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