题目内容
【题目】下表为某种微生物培养基的配方。
成分 | KH2PO4 | Na2HPO4 | MgSO4.7H2O | 葡萄糖 | 尿素 | 琼脂 |
含量 | 1.4g | 2.1g | 0.2g | 10.0g | 1.0g | 15.0g |
请回答相关问题:
(1)培养基中的KH2PO4和Na2HPO4的作用有____(答出两点即可)。
(2)依物理性质,该培养基属于____培养基,依功能看,该培养基属于____培养基。
(3)分解尿素的细菌才能在该培养基上生长,原因是____。
(4)甲、乙两名同学分别用不同方法对某一土壤样品中的尿素分解菌进行分离纯化,结果如下图。
①甲同学在平板划线操作的第一步之前、每次划线之前、划线结束时都要灼烧接种环,请问每次划线之前灼烧接种环的原因是____。
②乙同学采用的方法是 ___,接种时操作的失误可能是 ___。
【答案】提供无机营养、维持pH稳定 固体 选择 能合成脲酶 杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端 稀释涂布平板法 涂布不均匀
【解析】
1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法:将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板,接种,划线,在恒温箱里培养。在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后,均匀涂布在培养皿表面,经培养后可形成单个菌落。
2、分解尿素的细菌可以合成的脲酶将尿素分解成氨和二氧化碳。
3、培养基的种类:按物理性质可以分为固体培养基和液体培养基,按功能可以分为选择培养基和鉴别培养基。
(1)KH2PO4和Na2HPO4可以为微生物生长提供无机营养并维持pH稳定。
(2)该培养基含有琼脂,所以从物理性质上属于固体培养基;从功能上来看,该培养基以尿素作为唯一氮源,所以是选择培养基。
(3)该培养基以尿素作为唯一氮源,而分解尿素的细菌可以产生脲酶将尿素分解,所以可以在该培养基上生长。
(4)①甲同学是用的平板划线法,每次划线之前灼烧接种环的目的是杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。
②乙同学采用的接种方法稀释涂布平板法,从菌落生长情况来看,菌落在平板上分布不均匀,可能的原因是涂布不均匀。
【题目】癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后,可抑制T细胞活性并启动其凋亡,导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定,为制备抗体打基础。研究中所用引物α和β碱基序列见图1、几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2:
α链:5'-T C A C T C G A G A C C A T G C A G A T C C C A C A G G C G C C C-3' β链:5'-C T C G A A T T C T C A G A G G G G C C A A G A G C A G T G-3' 图1 |
(1)首先提取细胞中的mRNA反转录生成____________________作为模板;设计含有不同的限制酶切点的α和β序列为引物,通过____________________技术扩增目的基因。
(2)选用图1中的两种名称分别为____________________的限制酶将“pIRES2-EGFP质粒”载体进行双切,再用DNA连接酶将其与目的基因拼接,构建表达载体。该表达载体的组成,除了目的基因、标记基因抗卡那霉素基因外,还必须具有____________________等。
(3)而后一定温度下,与经过处理的感受态大肠杆菌混合培养在含有_____________培养基中,可筛选出已经完成转化的大肠杆菌,继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
(4)将扩增后的“pIRES2-EGFP载体/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后,为确定PD-1基因是否表达,检测细胞膜表面是否具有____________________。为判断其是否具有生物学活性和功能,则可裂解293T细胞,提取该物质看能否与____________________发生结合,从而阻断“PD-1与PDL-1信号通路”。研究中还会有一步骤,只将“pIRES2-EGFP载体”转入293T细胞,其目的是_________________________。