图1表示含有目的基因D的DNA片段长度和部分碱基序列.图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有Msp Ⅰ.BamH Ⅰ.Mbo Ⅰ.Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG.G↓GATCC.↓GATC.CCC↓GGG.请回答下列问题: (1)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段.产生的末端是末端.其产物长度为 . (2)若图1中虚线方框内的碱基� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

（12分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是末端，其产物长度为。

（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有种不同DNA片段。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是

。

【答案】

（每空2分，共12分）（1）平 537bp、790bp、661bp （2）4 （3）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接

【解析】

试题分析：(1)由题意可知SamI是从中轴线处切开，产生的平末端，产生的片段，左边534+3=537bp,中间796-6=790bp，右边658+3=661bbp三个片段。

（2）由图可知目的基因D有2个酶切位点，杂合子D可以切成3种不同长度的，突变后的d只有1个酶切位点可以切成2种不同长度的，其中有1种是和D相同，故共产生4种不同长度的片段。

（3）由图可知目的基因要完全切割下来可以用BamHI酶，用MboI酶也可以，同样质粒上也都有该酶切位点，但用MboI酶切后会将质粒上的2个抗性基因都破坏掉无法进行筛选，用BamHI酶切后质粒的抗生素A基因被破坏，故只能用含抗生素B的培养基鉴定。目的基因连进入但不能正确表达最可能的原因是因为同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接。

考点：本题考查基因工程相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。

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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列不正确的是（）

A. 图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接
B. 若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为537bp、790bp、661bp
C．若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后形成重组质粒，那么应选用的限制酶是MboI
D．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加相应抗生素的培养基进行培养

（13分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿连接。
（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿＿＿＿末端，其产物中有＿＿＿＿＿种不同的DNA片段。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。
（5）假设D基因是抗棉铃虫的Bt毒蛋白基因，将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉，如果__________________和_____________________，即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。

苏云金杆菌是一种对昆虫有毒害作用的细菌,其杀虫活性物质主要是一类伴孢晶体蛋白。伴孢晶体蛋白经昆虫肠液消化成毒性肽,并因此导致昆虫死亡。自从培育转基因植物抗虫棉成功后，研究人员又试图将抗虫基因导入水稻细胞中，从而培养出转基因抗虫水稻。研究人员从相关生物体内提取出的部分物质或结构如下图所示：图1表示含有目的基因（抗虫基因）的DWA片段长度(bp为碱基对）和部分碱基序列，图2表示作为运载体的一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp I,BamH I,Mbo I ，Sma I 4种限制性核酸内切酶，它们所识别的碱基序列和酶切位点（用“↓”表示）分别为C ↓CGG；G ↓ GATCC；n↓ GATC；CCC ↓ GGG。请回答下列问题：

(1)若用限制酶Sma I完全切割图1中所示DNA片段，则其产物有______种，长度分别为______。

(2)若将图2中质粒和目的基因通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______。

(3 )在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的水稻细胞，需配置相应培养基，其中添加的碳源是______，目的是提供营养和______。另外，培养基中除了含有必要营养物质、琼脂和激素外，一般还需要添加______(抗生素A/抗生素B)，该培养基从用途上看属于______培养基。

(4)在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程必须保证无菌，镊子等器械及培养基都可使用的灭菌方法是______。

（13分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿连接。

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿＿＿＿末端，其产物中有＿＿＿＿＿种不同的DNA片段。

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同DNA片段。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。

（5）假设D基因是抗棉铃虫的Bt毒蛋白基因，将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉，如果__________________和_____________________，即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。

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