题目内容
（13分）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由＿＿＿＿＿＿连接。
（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是＿＿＿＿＿＿＿末端，其产物中有＿＿＿＿＿种不同的DNA片段。
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共有＿＿＿＿＿种不同DNA片段。
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加＿＿＿＿＿的培养基进行培养。
（5）假设D基因是抗棉铃虫的Bt毒蛋白基因，将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉，如果__________________和_____________________，即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。
（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 （2）平 3 （3）4 （4）BamH I 抗生素B
（5）在棉花细胞内检测到Bt毒蛋白 棉花表现出抗棉铃虫的性状（棉铃虫吃了转基因棉的枝叶会中毒而死）
【解析】
试题分析：有DNA的结构可知一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接，由图知限制酶SmaⅠ切割产生的末端是平末端，其产物为537bp,790bp,661bp三种。基因D切割产物为537bp,790bp,661bp三种，基因d碱基对被替换后，替换部位无法被限制酶SmaⅠ切割，故产生661bp和1327bp两种片段，综上所述，为4种片段。由图可知形成重组质粒应选用的限制酶是BamH I，抗生素A基因已被破坏，所以培养基中应加抗生素B。将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉，如果在棉花细胞内检测到Bt毒蛋白和棉花表现出抗棉铃虫的性状（棉铃虫吃了转基因棉的枝叶会中毒而死）即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。
考点：基因工程
点评：本题考察了学生的理解能力和识图能力，难度较大，对于限制酶位点变化前后切割的不同，分析不到位是本题失分的主要原因。
