Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）某同学用新鲜的泡菜汁为实验材料分离纯化出乳酸菌，用来生产酸奶。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________对泡菜汁进行梯度稀释，然后采用__________法进行分离，可获得乳酸菌的单菌落。

（2）推测分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有__________和__________。分离纯化时应挑选出__________的菌落作为候选菌。

（3）获得纯化的乳酸菌后，可以利用纯牛奶作为原料制作酸奶，发酵常在__________（A．有氧+常温 B．无氧+常温 C．有氧+低温 D．无氧+低温）条件下进行。如果使用的是加了某些抗生素的纯牛奶作原料制酸奶，很有可能会发酵成怪味“酸奶”，其原因可能是__________。

（二）科学家用转基因方法培育“巨型小鼠”。图1为含大鼠生长激素基因的DNA及限制酶切割位点示意图；图2为含有相应标记基因和限制酶切割位点的质粒示意图，其中nptII为卡那霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，复制原点是质粒上必需的一段复制起始的序列，与重组质粒的自主复制有关。图3是转基因过程中的一个步骤。

（1）根据图1，在获得目的基因时，应使用限制酶__________（PvuⅠ / EcoRⅠ）进行切割。可以选择图2中的质粒__________（A / B）作为目的基因的载体，理由是__________。

（2）图3表示基因工程中将重组DNA分子导入受体细胞的过程，该步骤采用的技术方法是__________，通常选择__________作为受体细胞。

（3）获得含目的基因的细胞后，该细胞需要进行__________。然后再进行移植，通常移植最适宜的时期是发育到__________（A．2细胞胚胎 B．4细胞胚胎 C．早期囊胚 D．原肠胚）。再经分娩产仔就可以获得“巨型小鼠”。

Answer 1

【答案】 无菌水 涂布分离 鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸(或酸) 具有透明圈 B 抗生素具有杀菌作用，会杀死乳酸菌，导致乳酸发酵不能顺利进行 Pvu I A 选择质粒A，其复制原点则不会被限制酶切割，复制原点序列保持完整（在用切割目的基因的限制酶切割质粒B时，其复制原点会被限制酶切割，从而影响重组质粒的自主复制） 显微注射法 受精卵 胚胎体外培养 C

【解析】【试题分析】

本题考查微生物的分离纯化与培养，以及基因工程的相关知识，意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。题目比较基础，只要认真审题和读图并获取有用信息，再结合题目内容梳理所学基础知识，即可顺利作答。

（一）（1）乳酸菌属于厌氧菌，可用稀释涂布平板法分离纯化乳酸菌。具体操作为首先需要用无菌水对泡菜汁进行梯度稀释，然后采用涂布分离法进行分离，可获得乳酸菌的单菌落。

（2）在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的鉴别和分离；分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，因此，分离纯化时应挑选出具有透明圈的菌落作为候选菌。

（3）乳酸菌属于厌氧型生物，其无氧呼吸可产生乳酸，而且低温会抑制与无氧呼吸有关酶的催化活性，所以获得纯化的乳酸菌后，制作酸奶的发酵常在“无氧+常温”条件下进行，故B项正确；抗生素具有杀菌作用，会杀死乳酸菌，导致乳酸发酵不能顺利进行，因此，如果使用的是加了某些抗生素的纯牛奶作原料制酸奶，很有可能会发酵成怪味“酸奶”。

（二）（1）分析题图1可以发现，限制酶EcoRⅠ的切割位点处于目的基因中，而限制酶PvuⅠ的切割位点正好位于目的基因两端，所以在获得目的基因时，应使用限制酶PvuⅠ进行切割；分析图2可知，质粒A中的复制原点不会被限制酶切割，复制原点序列保持完整，而在用切割目的基因的限制酶PvuⅠ切割质粒B时，其复制原点会被限制酶切割，从而影响重组质粒的自主复制，因此，可以选择图2中的质粒A作为目的基因的载体。

（2）图3表示基因工程中将重组DNA分子导入受体细胞的过程，该步骤采用的技术方法是显微注射法，通常选择动物的受精卵作为受体细胞。

（3）获得含目的基因的细胞后，该细胞需要进行胚胎体外培养，然后再进行移植；通常移植最适宜的时期是发育到C早期囊胚，再经分娩产仔就可以获得“巨型小鼠”。