题目内容
【题目】在适宜的条件下，研碎绿色植物的叶肉细胞，做如图处理，
（1）从如图中可知，若要将质量不同的各种细胞器分离，采用的方法是_____．若要分离动物细胞结构，必须首先破坏细胞膜，破坏细胞膜最简便的方法是_____，
（2）在P1～P4四种沉淀物中，能被碱性染料染色的是_____P2中的椭球形或球形颗粒可能是叶绿体，进行验证的实验方法和现象是_____，
将破碎的酵母菌和未处理的酵母菌进行分组实验，如表，在相同的适宜条件下培养8～10h．
实验材料 | 取样 | 处理 | 分组 | 培养液 | 供氧情况 |
适宜浓度 酵母菌液 | 50mL | 破碎细胞 （细胞壁完整） | 甲 25mL | 75mL | 无氧 |
乙 25mL | 75mL | 通氧 | |||
未处理 | 丙 25mL | 75mL | 无氧 | ||
丁 25mL | 75mL | 通氧 |
（3）下列叙述正确的是_____．
A．甲组不产生酒精
B．乙组不产生水
C．丙组不产生CO2
D．四组都产生丙酮酸
（4）丁组的氧气消耗量大于乙组，对此实验现象的合理解释是_____
A．丁组细胞能够不断产生酶
B．丁组酵母菌在不断增殖
C．乙组没有细胞质基质，反应不完全
D．乙组细胞破碎，影响化学反应的连续性
【答案】（差速）离心法 将动物细胞放入低渗溶液或蒸馏水中，使细胞吸水涨破 P1 光照有氧气产生 D ABD
【解析】
（1）分析研碎绿色植物的叶肉细胞，各种成分中含有细胞器等，画出示意图： 
（2）分析表格：处理方法上对细胞进行破碎处理和未处理，破碎处理对细胞的影响是破坏了细胞的完整性，导致细胞的部分生命活动不能进行，比如继续合成mRNA等。
（1）分离细胞器的方法是差速离心法。动物细胞没有细胞壁的保护，将动物细胞放入低渗溶液或蒸馏水中，细胞会吸水涨破。
（2）能被碱性染料染色的物质是染色质，在P1～P4四种沉淀物中，含有染色质的是P1 （含有细胞核）。P2中的椭球形或球形颗粒可能是叶绿体，进行验证的实验方法和现象是光照有氧气产生。
（3）酵母既可以进行产酒精的无氧呼吸又可以进行有氧呼吸。
A、甲组在无氧条件下可以进行无氧呼吸产生酒精，A错误；
B、乙组可以进行有氧呼吸能产生水，B错误；
C、丙组可以进行无氧呼吸产生CO2，C错误；
D、有氧呼吸和无氧呼吸的第一阶段都能产生丙酮酸，甲乙丙丁四组都可以产生丙酮酸，D正确。
故选D。
（4）丁组细胞完整，进行有氧呼吸，其原因是丁组细胞能够不断产生酶、丁组酵母菌在不断增殖、乙组细胞破碎，影响化学反应的连续性，ABD正确；乙组有细胞质基质，C错误。
故选ABD。
【题目】I．基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，图中①-③示一种筛选方法的过程。pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Amp（氨苄青霉素）抗性基因和Tet（四环素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tet抗性基因功能性失活），请回答：
（1）图中①过程所需的酶是___________________。
（2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果A是_______________________。
（3）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括_________________。
（4）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）___________________________________________________。
II．基因工程中使用的II型限制性核酸内切酶通常可以识别长度为4-8个核苷酸的特异序列。下面示限制酶Sau3A I对DNA片段切割的结果。
……CAATGATCTCCTA…… Sau3A I ……CAAT + GATCTCCTA……
……GTTACTAGAGGAT…… ……GTTACTAG AGGAT……
（5）请分析，Sau3AI的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是______________。
III．下表列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点，图1（含两个抗性基因的质粒）和图2（含目的基因的外源DNA）中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
限制酶 | XhoI | BclI | SalI | BamHI | XbaI |
识别序列及酶切位点 | C↓TCGAG | T↓GATCA | G↓TCGAC | G↓GATCC | T↓CTAGA |
（6）据图1和图2分析，为了使目的基因和质粒实现定向连接和便于受体细胞的筛选，切割质粒的限制酶应选用_______________，切割含目的基因的外源DNA的酶应选用________________。
【题目】（1）基因工程操作过程的实现至少需要三种必要的工具：限制性核酸内切酶、运载体、_____。
（2）下列有关限制性核酸内切酶的描述，正确的是_____
A．从反应类型来看，限制性核酸内切酶催化的是一种水解反应
B．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
C．限制性核酸内切酶的活性受温度、pH的影响
D．质粒分子经限制性核酸内切酶切割后，含有2个游离的磷酸基团．
E．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
（3）与“限制性核酸内切酶”作用部位完全相同的酶是_____。
A．逆转录酶 B．RNA聚合酶 C．DNA连接酶 D．解旋酶
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
限制酶 | BamHⅠ | HindⅢ | EcoRⅠ | SmaⅠ |
识别序列及 切割位点 | G↓GATCC CCTAG↑G | A↓AGCTT TTCGA↑A | G↓AATTC CTTAA↑G | CCC↓GGG GGG↑CCC |
（4）用限制酶HindⅢ，BamH I和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如图3所示：P．F．Productions后期制作。据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA分子上的限制位点数目是_____．
A．HindⅢl个，BamHI 2个 B．HindⅢ2个，BamHI 3个
C．HindⅢ2个，BamHI 1个 D．HindIII和BamHI各有2个
（5）DNA分子结构的稳定性与氢键数目的多少有关．若对图1中质粒进行改造，增加其稳定性，表中哪种酶的酶切位点会增多？_____．
A． BamH I B． HindⅢC．EcoR I D．Sma I
（6）用图1中的质粒和图2中的外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____。
（7）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____。
