题目内容
【题目】欲测定新鲜绿叶中叶绿素a和叶绿素b的含量，可通过测定色素提取液的光密度值（OD值，各吸光物质的总OD值），再根据以下公式计算：
叶绿素a浓度=12.72D665-2.59D649；叶绿素b浓度=20.13D649-5.03D665（D665、D649表示光程为lcm、波长分别为665nm、649nm所测得的OD值）。
仪器与用具：OD值测定仪一套、天平、研钵、25mL容量瓶、漏斗、滤纸、95%乙醇、石英砂、碳酸钙等。
（1）完善实验步骤：
①取材：取新鲜植物叶片，擦净，剪碎（去掉中脉），混匀。
②研磨：称取剪碎的新鲜样品0.2g，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙及2~3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成____________，再加乙醇10mL，继续研磨至组织变白，并静置3~5min。
③过滤：在漏斗中放置滤纸，用乙醇湿润，把研磨液沿玻棒倒入漏斗，过滤到25mL棕色容量瓶中，然后用少量95%乙醇冲洗研棒、玻棒、___________及__________数次，洗涤液一并倒入漏斗中过滤，再用95%乙醇，将漏斗中色素全部洗入容量瓶，直至滤纸和残渣变白为止。最后定容至25mL。
④测定：把色素提取液摇匀，倒入____________内，以___________为空白对照，在光波长665nm、649nm条件下分别测定OD值。
⑤计算。
（2）实验
①过滤和定容选择的容量瓶为“棕色”的目的是为了防止____________。在测定叶绿素OD值时，选择波长为665nm、649m的红光，以防类胡萝卜素的干扰，其原因是_____________。
②本实验中，____________（需要/不需要）先作叶绿素a、b的标准曲线用于获得浓度值。
③若实验中过滤液较浑浊，则测得叶绿素含量将____________（偏大/不影响/偏小）。
④若根据实验结果计算得到叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为Ca、Cb（单位mg/L），则待测植物新鲜叶片中叶绿素的含量是_____________mg/g（用Ca、Cb表示）。
【答案】匀浆 研钵 残渣 光程lcm的比色杯 95%乙醇 叶绿素（被光照）分解 类胡萝卜素不吸收红光 不需要 偏大 （Ca+Cb）/8
【解析】
1、叶绿体色素提取的原理：叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂，所以，可以在叶片被磨碎以后用乙醇提取叶绿体中的色素。
2、色素分离原理：叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。根据这个原理就可以将叶绿体中不同的色素分离开来。
（1）完善实验步骤：
②在提取色素时，加入石英砂和碳酸钙及2~3mL95%乙醇，充分、迅速研磨成匀浆。
③为了获得更多的色素，需要用少量95%乙醇冲洗研棒、玻棒、研钵和残渣，最后定容至25mL。
④该实验测定色素含量的方法是分光光度法，所以需要将色素溶液倒入光程lcm的比色杯，以溶剂（95%乙醇）为空白对照，测定OD值。
（2）实验
①叶绿素在光照条件下会分解，所以选择的容量瓶为“棕色”的目的是为了防止叶绿素被光照分解。类胡萝卜素不吸收红光，吸收蓝紫光，所以选择波长为665nm、649m的红光，以防类胡萝卜素的干扰。
②由于在题干中已经给出了叶绿素的计算公式，所以不需要作标准曲线。
③如果滤液浑浊，对光的吸收值（OD）增大，根据计算公式，叶绿素含量将会偏大。
（4）计算数据叶绿素a和叶绿素b的总浓度时（Ca+Cb）mg/L，所以25mL的总量为
，这个数据是0.2g叶片中测得的数据，所以每克叶片含的叶绿素为
mg。
