题目内容
【题目】土壤中含有能将难溶性磷酸盐转变成植物可以吸收利用的可溶性磷的优良解磷菌株Q。下图1表示制备固体培养基过程中的某操作，图2是科研人员从土壤中分离出菌株Q的部分过程示意图。
请回答下列问题：
（1）图1所示操作称为__________________，待平板冷凝后__________，以防止__________________。
（2）图2所示接种方法是_______________________。在3个平板上分别接入0．1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上菌落数分别是38、42、40，则1 g土壤中的活菌数约为__________________个。
（3）图是某同学利用不同于图2方法分离菌株Q的示意图。下列对其操作及结果的叙述错误的有_______。
a．操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理
b．划线时沾有菌种的接种环不能插入培养基中
c．只有在⑤区域中才能得到所需菌落
d．整个过程需要对接种环进行6次灼烧
（4）固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如下图所示），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解难溶磷酸盐的能力大小。下表是初步筛选出的三种优良解磷菌株。
菌株 | 透明圈直径(D) | 菌落直径(d) |
M—3—01 | 18．8 | 12．3 |
B3—5—6 | 20．7 | 8．0 |
T—4—01 | 9．1 | 6．5 |
根据实验结果分析，溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是______________。该菌种分离纯化后，常用______________________法进行长期保存。
【答案】倒平板 倒置 皿盖上的冷凝水落入培养基 稀释涂布平板法 4×108 a、c B3－5－6 甘油管藏
【解析】
1、微生物常用的接种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、计算样品菌液中的菌株数时，每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表样品菌液的稀释倍数。
（1）图1所示操作称为倒平板，待平板冷凝后需要将其倒置，以防止皿盖上的冷凝水落入培养基，对培养基造成污染。
（2）图2所示接种方法是稀释涂布平板法，1g土壤共稀释了106倍。平板上生长的平均菌落数=(38+42+40)÷3=40个，每克样品中的菌株数=(C÷V)×M=(40÷0.1)×106=4×108个。
（3）a、操作前用70%的酒精对接种人员的双手进行消毒处理，a错误；
b、划线时沾有菌种的接种环不应划破培养基表面，b正确；
c、在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落，c错误；
d、在每次划线前和最后一次划线结束均需对接种环灭菌，因此需要对接种环进行6次灼烧，d正确。
故选ac。
（4）根据实验原理中“透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解难溶磷酸盐的能力大小”，结合表格数据可以确定溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是B3-5-6。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法。
