Question

【题目】土壤中大部分磷与 Ca2+、Al3+结合形成难溶性磷酸盐，导致植物不能直接吸收利用。科研人员从土壤中分离出能将难溶性磷酸盐转化为可溶性磷酸盐的曲霉，并比较其对不同难溶性磷酸盐的溶磷效果，请回答相关问题：

（1）配制培养基：称取葡萄糖10g、MgSO4·7H2O 0.3g、羟基磷灰石5g、(NH4)2SO4 0.5g、NaCl 0.2g、KCl 0.2g、MnSO4 0.03g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g，用水溶解后定容至1L，调节pH至_____性，灭菌并冷却，加入无菌的链霉素和氯霉素溶液，混匀后倒平板。链霉素和氯霉素属于抗生素，其作用是______________________________。

（2）制作土壤悬液：称取适量土壤，溶于____________，并进行梯度稀释；该过程应在___________附近进行。

（3）目的菌的分离与鉴定：将少量稀释液滴于培养基，用___________将样液均匀涂布在培养基的表面，培养后得到单菌落，鉴定出多种溶磷曲霉比如黑曲霉。若要保存鉴定的菌种，可在菌液中加入无菌且适量的______，混匀后放在-20℃的冷冻箱中保存。

（4）黑曲霉对不同难溶性磷酸盐溶磷效果的比较：将黑曲霉接种到平板A（含磷酸钙）和平板B（含磷酸锌）上，25℃培养一段时间后，测定溶磷圈的直径分别为5.8cm和3.8cm，对应的菌落直径分别为3.3 cm和1.2 cm（见图）。由此可得出黑曲霉对____（填“磷酸钙”或“磷酸锌”）的溶磷效果较好，理由是___________________________________________。

Answer 1

【答案】 酸 抑制或杀死细菌等杂菌 无菌水 酒精灯的火焰 涂布器 甘油 磷酸锌 溶磷圈直径与菌落直径的比值反应溶磷能力，而含磷酸锌的平板对应的此比值较大

【解析】由题文描述可知：该题综合考查学生对微生物培养基成分、作用和制作流程以及菌种的分离和保存等相关知识的识记和理解能力。

(1) 霉菌为真核生物，培养霉菌时需要将培养基的pH调至酸性。链霉素和氯霉素都是作用于原核生物的核糖体，从而阻碍蛋白质合成达到抗菌的作用，可见，在配制培养基时，加入链霉素和氯霉素的作用是抑制或杀死细菌等杂菌。

(2)为了防止杂菌污染，在制作土壤悬液时，溶解土壤要用无菌水；进行梯度稀释时应在酒精灯的火焰附近进行。

(3) 纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。运用稀释涂布平板法接种微生物时，所用的工具是涂布器。在-20℃保存菌种的方法为甘油管藏法，需要在菌液中加入适量甘油。

(4)依题意可知：溶磷圈直径与菌落直径的比值，平板A（含磷酸钙）上的为5.8÷3.3≈1.8，平板B（含磷酸锌）上的为3.8÷1.2≈3.2。因溶磷圈直径与菌落直径的比值反应溶磷能力的大小，而含磷酸锌的平板对应的此比值较大，所以黑曲霉对磷酸锌的溶磷效果较好。