Question

【题目】请回答下列蛋白质的提取和分离实验相关问题：

（1）凝胶色谱法是根据_________________分离蛋白质的有效方法。

（2）蛋白质的提取和分离实验中洗涤红细胞的目的______________________________。

（3）重复洗涤三次，直至____________________，表明红细胞已洗涤干净。在该过程中离心速度过高和时间过长会导致___________________________。

（4）在凝胶色谱柱装填时不得有气泡存在，原因为气泡会________________________。在操作中不能发生洗脱液流干漏出凝胶颗粒的现象，如果发生则___________________。

（5）在蛋白质的分离过程中如果观察到__________________________________，说明色谱柱制作成功。

Answer 1

【答案】相对分子质量的大小 去除杂蛋白 上清液不再呈现黄色 白细胞等一同沉淀，达不到分离效果 搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 凝胶色谱柱需要重新装填 红色区带均匀一致地移动

【解析】

血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：
（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。
（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（1）凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，分子量大的路径短、速度快。

（2）蛋白质的提取和分离实验中，首先要用生理盐水洗涤红细胞，其目的是去除杂蛋白。

（3）洗涤红细胞后有利于后续步骤的分离纯化，洗涤干净的标志是离心后的上清液不再呈现黄色；该实验的目的是分离白细胞，离心速度过高和时间过长会导致白细胞等一同沉淀，而达不到分离效果使实验失败。

（4）由于气泡的存在会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，所以在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生。在操作中不能发生洗脱液流干漏出凝胶颗粒的现象，如果发生则凝胶色谱柱需要重新装填。

（5）在蛋白质分离过程中，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。