题目内容
【题目】亨廷顿舞蹈病是由单基因（HTT）突变导致的神经退行性疾病，中科院利用基因编辑（CRISPR/Cas9）技术首次成功培育出亨廷顿舞蹈病的基因“敲入”猪模型，为制备其它神经退行性疾病大动物模型提供了技术范本和理论依据。具体操作过程如下图：
（1）基因编辑技术所使用的CRISPR/Cas9系统需要对特定的DNA序列识别并切割，其功能类似于基因工程工具中的___________。
（2）过程②所利用的生物技术是___________。过程①~⑥体现的生物学原理是___________。
（3）根据图1中信息，结合已有知识，基因编辑技术与转基因技术所利用的遗传学原理是___________。
（4）图1中成纤维细胞中的目的基因是___________。
（5）在此研究之前，研究人员已建立转基因亨廷顿舞蹈病的猪模型，但出生不久后即死亡。由图可知，与转基因猪模型相比，基因“敲入”猪模型优势在于___________。
A．操作过程更简单 B．致病基因可遗传给后代
C．培育的时间较短 D．发生突变的概率更高
（6）假如上图中目的基因用J表示，其所在的DNA片段如下图2所示，图3示所用质粒的部分碱基序列。（现有4种限制酶：MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、EcoRⅠ，能识别的碱基序列和酶切位点分别为：C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、G↓AATTC）
据图2、3分析，构建重组质粒的过程中，能（宜）使用的限制酶是___________。
【答案】限制酶 细胞核移植技术 动物细胞核的全能性 基因重组 含人突变HTT基因片段的猪的HTT基因 B BamHⅠ
【解析】
根据题意和图示分析可知：图2中：DNA片段含有2个限制酶MspⅠ切割位点。基因J两侧序列为GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。
图3中：质粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A。
（1）CRISPR/Cas9系统可以对特定的DNA序列识别并切割，其功能类似于基因工程工具中的限制性酶。
（2）过程②含有目的基因的成纤维细胞的细胞核重组到去核的卵细胞中，所利用的生物技术是细胞核移植技术。过程①~⑥过程一个重组细胞最后得到亨廷顿舞蹈病的猪，体现的生物学原理是动物细胞核的全能性。
（3）根据图1中信息，将人的突变基因和猪的HTT基因重新组合在一起，故基因编辑技术与转基因技术所利用的遗传学原理是基因重组。
（4）根据图1中信息，成纤维细胞中的目的基因是含人突变HTT基因片段的猪的HTT基因。
（5）由图可知，基因“敲入”猪模型可以通过遗传将其性状遗传给后代，故与转基因猪模型相比，基因“敲入”猪模型优势在于致病基因可遗传给后代，故选B。
（6）由图可知目的基因要完全切割下来可以用BamHI酶，不能用MboI酶，因为用MboI酶切后会将质粒上的2个抗性基因都破坏掉无法进行筛选，用BamHI酶切后质粒的抗生素A基因被破坏，故只能用含抗生素B的培养基鉴定。
【题目】豆浆是深受中国百姓喜爱的饮品，但易变质，保质期较短。科研人员对变质豆浆中的腐败细菌进行分离，并研究了常用灭菌方法对腐败细菌的灭杀效果，为生产豆浆时，优化保质方法提供依据。主要研究过程如下：
①豆浆变质处理 将2种市售豆浆A、B和自制豆浆在无菌操作台上分别装入已灭菌的250mL三角瓶中，密封、37℃条件下，放置7d后，豆浆发生变质。
②腐败细菌的初步分离和计数 取变质的豆浆在无菌条件下接种到细菌培养基上，培养一段时间后，统计各培养基上菌落种类和数量。结果如下表：
细菌序号 | 菌落特征 | 菌落直径/mm | 菌落数/个 | ||
豆浆A | 豆浆B | 自制豆浆 | |||
S1 | 表面有白色绒毛，圆形边缘不规则 | 5 | 5 | 3 | 7 |
S2 | 白色，表面无绒毛，有白色液滴 | 1～2 | 18 | 11 | 24 |
S3 | 黄色，表面无绒毛，如同黄色液斑 | 20～30 | 11 | 7 | 15 |
③比较乳酸链球菌素添加量对腐败细菌的抑制效果 以自制的新鲜豆浆为材料，经相应处理后，在37℃下放置35d后，统计豆浆中腐败细菌数量，结果如图。
请回答下列问题：
（1）步骤①中三角瓶的常用灭菌方法是__________，步骤②中培养基的常用灭菌方法是______________。
（2）步骤②中适宜采用的接种方法是____________。区分菌落种类的依据是__________________________。统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以有效防止___________________________。
（3）乳酸链球菌素是一种天然食品防腐剂，它是由34个氨基酸组成的多肽。步骤③结果表明，最能耐受乳酸链球菌素的细菌是__________；为有效防止豆浆腐败，在生产中乳酸链球菌素的添加量应控制在___________ mg．kg-1左右。
（4）与用抗生素防腐相比，使用乳酸链球菌素防腐的明显优点是____________________。