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13.分离土壤中分解尿素菌的实验操作中,对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是(  )
A.制备浸出液的土壤取自土壤的表层
B.涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌
C.牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源
D.接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒

分析 从土壤中分离微生物的一般步骤是:土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株.回顾和梳理分离土壤中分解尿素菌的实验操作的相关知识,认真分析各个选项即可正确作答.

解答 解:A、制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大,A错误;
B、涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染,与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大,B错误;
C、该培养基必须以尿素为唯一的氮源,不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源,该操作对实验影响最大,C正确;
D、接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒,可能会造成污染,但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大,D错误.
故选:C.

点评 本题主要考查微生物的纯化,意在强化学生对微生物的培养及无菌操作的相关知识的识记、理解与运用.

练习册系列答案
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5.白僵菌可感染农业害虫,常作为防治害虫的菌剂.由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感且杀死害虫的能力较弱,科研人员对其进行基因工程改造,流程如图所示.

(1)苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫.已知该基因的全部序列,科研人员通过人工合成(或“化学合成”)法和PCR 技术获得大量毒蛋白基因片段.据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒l 的过程需要用到的工具酶是NcoI、BamHI和DNA连接酶.
(2)重组质粒1和Bar 基因(草丁膦抗性基因)各自用XbaI 酶处理,得到酶切片段.重组质粒l 的酶切片段再用去磷酸化酶处理,使端游离的磷酸基团脱离,目的是防止重组质粒1酶切片段自身连接(或“相互连接”).将未用去磷酸化酶处理的Bar 基因与重组质粒1连接,获得重组质粒2.获得的重组质粒2的是如图中的C.

(3)将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2 在白僵菌细胞内被修复.一段时间后用含有草丁膦的平板培养基进行筛选,获得含有Bar 基因的重组白僵菌.
(4)提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入逆转录酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR 反应,用以检测毒蛋白基因是否完成了转录.
(5)科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的死亡害虫数,以判断重组白僵菌的杀虫效果.

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