题目内容
【题目】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力,将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养,可以提取干扰素用于制药。请回答:
(1)采用PCR技术可扩增干扰素基因。该PCR反应体系的主要成分应该包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、ATP、________和酶。PCR技术采用_______方法打开DNA双链。
(2)在逆转录酶的作用下,能以干扰素基因产生的mRNA作为模板按照________原则获得cDNA片段。
(3)进行转基因操作前,需用________酶短时处理幼蚕组织,以便获得单个细胞。
(4)基因工程常用质粒作为运载体,理由是_________________(写出3点)。
(5)将目的基因导入动物细胞最常用的方法是_________。此方法的受体细胞多是_________。
【答案】对干扰素基因特异性的DNA引物对 加热到90-95℃ 碱基互补配对原则 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) 有多个限制酶切位点、能在受体细胞中稳定保存并复制、有标记基因 显微注射技术 受精卵
【解析】
1、PCR技术的条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。
过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
2、基因工程中最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
3、将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术,此方法的受体细胞多是受精卵。
(1)利用PCR技术可扩增干扰素基因需要有模板DNA、四种脱氧核苷酸、对干扰素基因特异性的DNA引物对、热稳定DNA聚合酶,ATP;PCR通过加热到90-95℃将DNA双链解旋。
(2)逆转录作用是以RNA为模板,在逆转录酶的催化作用,按照碱基互补配对的原则获得cDNA分子。
(3)动物细胞培养需要用胰蛋白酶时处理幼蚕组织,以便获得单个细胞。
(4)质粒作为运载体的条件:质粒具有能在受体细胞中稳定保存并复制、具有多个限制酶切割位点、具有标记基因等特点。
(5)将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射技术;多选择动物受精卵作为受体细胞。